Разное

Определить оригинальный ид вк: Узнать оригинальный id в контакте. Как узнать id (айди) страницы ВК (ВКонтакте)? И как поменять свой id (айди) ВК

17.09.1982

Содержание

Подбор модели брелока Pandora и Pandect (устройства) по серийному номеру

Как подобрать брелок к сигнализации?

Как и где найти серийный номер?

Практически все изделия Pandora и Pandect обладают уникальным серийным номером, который присваивается на производстве. Нас часто спрашивают, как узнать, какая автосигнализация установлена на автомобиль. Этот вопрос чаще всего возникает, когда автовладелец теряет или ломает брелок или метку от автосигнализации, так как для того, чтобы подобрать подходящие комплектующие, необходимо знать точную модель автосигнализации, а иногда и версию прошивки. Самый простой способ узнать модель системы — определить её по серийному номеру. Но где же найти серийный номер?

В документации от автосигнализации

Серийный номер всегда указывается в гарантийном талоне. Обычно на последней или предпоследней странице, где ставится печать организации продавца (установочного центра). Там же есть название модели и отметки о дате производства.

На индивидуальной карточке владельца

Каждая автосигнализация Pandora или Pandect комплектуется индивидуальной картой владельца, на которой под защитным слоем указан код для аварийного отключения системы. На этой же карточке есть и серийный номер.

На упаковке от автосигнализации

Все коробки от сигнализаций маркируются серийным номером. Конечно, многие выкидывают коробку, но некоторые находят ей полезное применение – например, удобно хранить документы или какую-то мелочь в гараже.

На брелках и метках

Это, пожалуй, самый простой способ определения серийного номера. Достаточно взять брелок и посмотреть на его оборотную сторону. Если серийный номер стерся или его не было, то необходимо вынуть батарейку, под которой также указан серийный номер платы брелока. Иногда под батарейкой можно увидеть сразу два серийных номера, обычно первый номер — это номер корпуса, а второй – самой платы. Один из этих номеров точно позволит получить искомую информацию.

На метках серийный номер чаще всего находится на самой плате, поэтому для того, чтобы до него добраться, придется разобрать метку. То же самое касается и дополнительного брелока.

На RF-модуле

Как уже говорилось выше, абсолютно все компоненты системы маркируются серийным номером, и RF-модуль не исключение. Правда, его придется снять с места крепления. Постарайтесь делать это аккуратно, т.к. наклейка с серийным номером может оказаться на липкой ленте, и тогда прочитать номер будет проблематично.

На базовом блоке системы

Если все предыдущие советы не помогли, то последний вариант – добраться до базового блока системы и определить серийный номер по нему. На самом деле, это крайний вариант, который рекомендуется проводить только в официальном сервисном центре Pandora.


Расскажите друзьям

Отслеживание почтовых отправлений и посылок, трекинг почтовых отправлений

Как узнать, где моя посылка?

Для того, чтобы отследить, и узнать где находится Ваша посылка, достаточно ввести ее почтовый идентификатор в поле со значком , кликнуть мышкой по кнопке Отследить посылку, и Вы практически мгновенно узнаете, где и когда проходила Ваша посылка, и где находится в данный момент.

Трекинг посылок на нашем сайте сделан максимально просто, для того чтобы отследить посылку, Вам не понадобится вводить код с картинки как это сделано в подобных сервисах.

Наш сервис, автоматически собирает информацию с различных сайтов почтовых служб и логистический компаний всего мира, для того чтобы Вы могли без забот отслеживать все свои посылки в одном месте.

Вы можете сохранять все свои трек-коды, в истории трекинга, и в дальнейшем отслеживание посылок будет таким же простым, как и отслеживание одного трек-кода.

Отслеживание почтового отправления, не такая сложная процедура, как может показаться.

Что такое трек-код? Трек-код (почтовый идентификатор, номер отслеживания) — уникальный код, позволяющий следить за перемещением почтового отправления по стране/миру.
По регламенту «Всемирного Почтового Союза», трек-номер (идентификатор почтового отправления) состоит из 2х латинских букв, 9 цифр и 2х латинских букв указывающих страну отправителя (пример: LM123456789CN).
Первая буква служит как индикатор типа отправления.
Вторая буква служит для обозначения типа отправки, например: авиа, море, ж/д или как обычная буква.
Последние две буквы служат для обозначения страны отправителя.

    Варианты обозначения типа отправления:
  • «C» — обыкновенная посылка (более 2 кг), отслеживание до вручения
  • «R» — мелкий пакет (менее 2 кг), отслеживание до вручения
  • «L» — мелкий пакет (менее 2 кг), отслеживание до вручения, не разыскивается почтой страны получателя
  • «E» — экспресс отправление (EMS), вторая буква является порядковой, отслеживание до вручения
  • «V» — застрахованное письмо
  • «А» — мелкий пакет, не отслеживается по стране получателя, не разыскивается почтой страны получателя
  • «U» — мелкий пакет, не отслеживается по стране получателя, не разыскивается почтой страны получателя
  • «Z» — мелкий пакет, частичное отслеживание по стране получателя (только информация о поступлении в почтовое отделение получателя)
Трек-номера, которые начинаются на LJ или LС отправляются USPS First Class Mail / USPS Priority Flat rate Envelope и отследить их невозможно.

Российский почтовый идентификатор (РПО) состоит из 14 чисел и находится в чеке, выдаваемом при приеме почтового отправления.
Выглядит он так: 123456(80)12345 6, вводить в поле для трекинга без скобок и пробелов: 12345680123456.

Как долго ждать посылку из Китая?

Как это ни странно, но сейчас посылки из Китая приходят гораздо быстрее, чем например в 2013 году.
В среднем, время доставки посылки почтой России занимает около 3 недель.
Отслеживание почтовых отправлений становится возможным через 1-3 дня после отправки вашего заказа, и внесения идентификатора в почтовые системы.

У нас осуществляется автоматический треккинг посылок, и в случае изменения статуса посылки мы уведомим Вас на email или sms сообщением.

Что делать, если посылка не отслеживается или идет слишком долго? Вы сделали первый заказ на aliexpress или ebay и с нетерпением ждете, когда же продавец отправит Ваш заказ.
Как правило, информация о трек-коде начинает обновляться через 7-10 дней после получения трек-кода, или через 1-2 дня после (реальной) передачи посылки в почтовое отделение.
Небольшие магазины выдают трек-код сразу, но относят заказ на почту тогда, когда соберется определенное количество посылок, это может быть 1 раз в 7-14 дней.
У магазинов побольше, передача посылок почте происходит чаще, и соответственно первая информация по трек-кодам таких магазинов появляется раньше.

Но что же делать, если прошел месяц или два, а заказ так и не приехал или что еще хуже, посылка не отслеживается ни на одном сайте.
Пока активна защита заказа, ждите, а если после окончания срока защиты посылка так и не приехала, то открывайте спор
На открытие спора покупателю дается 15 дней после завершения срока защиты заказа.
Такова специфика покупок в Китае — товары стоят дешевле, но для получения необходимо подождать.
Просто, перед тем как сделать заказ, надо быть готовым к тому, что посылка может приехать быстро, за пару недель, а может болтаться два — три месяца, или вообще не приехать.

Но так или иначе, не стоит переживать!
На Китайских торговых площадках вроде Aliexpress, iTao, eBay действует отлаженная система защиты покупателей, которая в случае обмана или не доставки заказа будет на Вашей стороне.
Просто ждите, пока действует защита, и не волнуйтесь.
Посылка приедет, а если и не приедет, то продавец вернет Вам деньги.
Главное следите за счетчиком защиты заказа, и если посылка не приехала или почтовое отправление не отслеживается не пропустите срок окончания защиты, и всегда открывайте спор.
Если посылка отслеживается, и в ответ на открытие Вашего спора, продавец продлевает срок защиты заказа и закрывает спор, снова ждите, и снова за несколько дней до окончания защиты открывайте спор.
И если время защиты заказа, после открытия второго спора подошло к концу, и время реальной доставки превысило заявленный продавцом срок, то открывайте спор с требованием полного возврата денег по причине того что заказ не доставлен в указанный продавцом срок.

Остерегайтесь подделок

ВНЕШНИЙ ВИД КОРОБКИ

Больше способов распознать подделку
  • СЛЕВА: ПОДЛИННОЕ УСТРОЙСТВО JBL — СПРАВА: ПОДДЕЛКА

    Оригинал: изображение на коробке высокого качества, коробка хорошо склеена и собрана.

  • СЛЕВА: ПОДЛИННОЕ УСТРОЙСТВО JBL — СПРАВА: ПОДДЕЛКА

    Оригинал: плотная упаковка из высококачественного картона.

  • СЛЕВА: ПОДЛИННОЕ УСТРОЙСТВО JBL — СПРАВА: ПОДДЕЛКА

    Оригинал: на коробке присутствует текстурный принт.
    Подделка: коробка сделана из обычного картона.

  • СЛЕВА: ПОДЛИННОЕ УСТРОЙСТВО JBL — СПРАВА: ПОДДЕЛКА

    Оригинал: на крышку коробки нанесена информация об импортере на территорию РФ, данные о производителе, штрих-код, EAN-код, серийный номер устройства.
    Подделка: на коробке подобная информация отсутствует.

  • СЛЕВА: ПОДЛИННОЕ УСТРОЙСТВО JBL — СПРАВА: ПОДДЕЛКА

    Оригинал: на внутренней стороне крышки коробки вы найдете цветное изображение, присутствует плотная картонная крышка черного цвета с названием модели.
    Подделка: изображение отсутствует, картонная крышка заменена поролоновой прокладкой.

  • СЛЕВА: ПОДЛИННОЕ УСТРОЙСТВО JBL — СПРАВА: ПОДДЕЛКА

    Ширина 212.92 мм
    Высота: 89.36 мм

    Ширина 213.37 мм
    Высота: 90.11 мм

  • СЛЕВА: ПОДЛИННОЕ УСТРОЙСТВО JBL — СПРАВА: ПОДДЕЛКА

    Оригинал: центральная кнопка включения немного выступает из корпуса, остальные кнопки надежно прикреплены к корпусу.
    Подделка: центральная кнопка включения заметно выступает из корпуса, остальные кнопки имеют заметные зазоры между корпусом и самой резиновой кнопкой.

  • СЛЕВА: ПОДЛИННОЕ УСТРОЙСТВО JBL — СПРАВА: ПОДДЕЛКА

    Оригинал: оранжевая плашка логотипа крупнее, буквы JBL меньше, плашка закреплена изнутри и снять ее трудно.
    Подделка: оранжевая плашка логотипа меньше, буквы JBL больше, плашка приклеена на двустороннюю клейкую ленту.

  • СЛЕВА: ПОДЛИННОЕ УСТРОЙСТВО JBL — СПРАВА: ПОДДЕЛКА
  • СЛЕВА: ПОДЛИННОЕ УСТРОЙСТВО JBL — СПРАВА: ПОДДЕЛКА

    Оригинал: крышка сделана из качественного материала, твердая, легко открывается, имеет резиновый уплотнитель по периметру для герметизации.
    Подделка: изготовлена из низкокачественной резины, мягкая, с трудом открывается, не защищает от попадания воды внутрь.

  • СЛЕВА: ПОДЛИННОЕ УСТРОЙСТВО JBL — СПРАВА: ПОДДЕЛКА

    Оригинал: пассивные излучатели матовые, логотип JBL меньшего размера.
    Подделка: пассивные излучатели глянцевые, неровные, большой логотип JBL.

  • СЛЕВА: ОРИГИНАЛЬНЫЙ БЛОК ПИТАНИЯ ДЛЯ CHARGE 3 — СПРАВА: ПОДДЕЛЬНЫЙ

    Вес оригинала: 66 грамм

    Вес подделки: 41 грамм

    Logotypy zgodności nadrukowane na zasilaczu autentycznym — brak logotypów na podróbce.

  • СЛЕВА: ОРИГИНАЛЬНЫЙ КАБЕЛЬ ДЛЯ ЗАРЯДКИ — СПРАВА: ПОДДЕЛЬНЫЙ

    Оригинал: плоский кабель питания, упакованный в пластиковую термоусадочную пленку.
    Подделка: перевязанный круглый кабель.

  • СЛЕВА: ПОДЛИННОЕ УСТРОЙСТВО JBL — СПРАВА: ПОДДЕЛКА

    Оригинал: под крышкой располагаются 3 разъема, серийный номер, мелким шрифтом по периметру отсека написана страна производства.
    Подделка: присутствует разъем для microSD карты, нет серийного номера.

  • НАДЕЖНАЯ ПОКУПКА

    Для уверенности в том, что вы покупаете подлинный продукт JBL, а не подделку, вам нужно обратиться к авторизованному партнеру из списка на сайте ru.jbl.com в разделе «Где купить» или приобрести продукт напрямую в нашем официальном интернет-магазине harman.club. Нажмите здесь, чтобы узнать больше о том, как определить потенциальный контрафактный продукт JBL перед покупкой.


    ГАРАНТИЯ И ОБСЛУЖИВАНИЕ КЛИЕНТОВ

    Изделия JBL, приобретенные у неавторизованных посредников, не имеют права на гарантию и бесплатное обслуживание клиентов в авторизированных сервисных центрах JBL.


    JAK ROZPOZNAĆ PODRABIANE PRODUKTY JBL

    1. Все поддельные устройства заметно отличаются от оригинальных внешним видом и качеством и продаются по низким ценам. Подлинные продукты JBL изготавливаются из высококачественных материалов и предназначены для того, чтобы обеспечить вам уникальное качество прослушивания.
    2. Логотип, текст на коробке подделки не похожи на оригинальные.
    3. Если у возникли вопросы, свяжитесь с нашей службой поддержки.

    ЧТО ДЕЛАТЬ, ЕСЛИ ВЫ ДУМАЕТЕ, ЧТО ПРИОБРЕЛИ ПОДДЕЛКУ

    • Посетите страницу с перечнем авторизированных дилеров JBL, чтобы узнать, есть ли в этом списке магазин, в котором вы приобрели устройство. Вы также можете обратиться в службу поддержки JBL, чтобы узнать, является ли данный магазин официальным партнером.
    • Свяжитесь с магазином и попробуйте вернуть товар с полным возвратом стоимости (не предоставляйте продавцу личной информации)

Не можете найти то, что искали?

Узнать оригинальный id в контакте. Как узнать id страницы ВКонтакте

Необходимость получения ID ВКонтакте может возникнуть в самых различных ситуациях. Например, нужно восстановить доступ к аккаунту (когда нет возможности использовать телефон), скинуть свою ссылку определённому человеку или изменить ID из случайного набора цифр на красивый никнейм. Рассмотрим, какими способами можно узнать ID учётной записи ВКонтакте и как это сделать проще всего.

Как узнать свой идентификатор ВКонтакте

ID – это уникальный идентификатор, который привязывается к учётной записи тогда, когда человек решил её зарегистрировать. Разберём методы выяснения его значения.

Если ID не менялся

Проще всего выяснить ID собственного или чужого аккаунта будет в том случае, если владелец не изменял ссылку. Чтобы увидеть номер, достаточно лишь войти в Контакт, открыть страницу и посмотреть на число после «ID» в поисковой строке браузера.

Вышеприведённый способ не потребует никаких дополнительных усилий, но подойдёт лишь тогда, когда ID не был сменён. Что делать в противном случае, рассмотрим далее.

Если изменен на буквенный ник

Может произойти и так, что смена числового значения на буквенное уже произошла, а изначальный ID узнать нужно.

Инструкция по поиску номера будет выглядеть следующим образом:

  1. Открываем аккаунт, кликаем по иконке аватарки в правом верхнем углу и переходим в «Настройки».

  1. Выбираем раздел «Общие» и спускаемся в конец окна, где в поле «Адрес страницы» будет отображена цифра ID. Система позволяет вернуть его вместо буквенного значения. Для этого ник нужно заменить на «id123», где 123 – цифры конкретно вашего номера учётной записи. Привязать чужой id не получится. Любая буква в ID превращает номер в ник.

  1. Сохраняем изменения (если они были внесены). Данный метод будет работать всегда (конечно, если у пользователя есть доступ).

Возникает вопрос: как найти числовой ID, если он изменён на буквенный, а страница чужая и пароля к аккаунту нет? В данном случае достаточно открыть любую фотографию и кликнуть по ссылке – в отображённом тексте набор цифр до нижнего подчёркивания и будет представлять собой ID страницы. Имея подобную ссылку, всегда можно узнать, чей аккаунт был открыт.

Но что же делать, если у пользователя нет фотографий? Не всё потеряно – следует лишь зайти в один из доступных разделов, например, в видеозаписи или музыку. В адресной строке после слов «videos» или «audios» будет отображён числовой ID открытой страницы. То же самое можно проделать и с записями на стене или с личными сообщениями – при открытой записи или в диалоге необходимо кликнуть по строке поиска и скопировать из неё ID.

Как видим, всё максимально просто. Вышеперечисленные варианты можно применять не только по отношении к собственной странице, но и к аккаунтам других пользователей.

Как посмотреть с телефона

Как показывает статистика, юзеры редко «сидят» в социальных сетях через персональный компьютер – большинство из них предпочитают использовать мобильные телефоны.

Чтобы отыскать айди через телефон, достаточно:

  1. Открыть нужную страницу через официальное приложение, нажать три точки и выбрать пункт «Копировать ссылку». Сделать это можно и через браузерную версию.

  1. Вставить скопированное значение в любое пустое поле. Например, в поле для сообщений, в заметки или в браузер. ID будет на своём месте.

  1. Провести данную операцию можно и с любой фотографией или записью (если id был заменён).

Мы подробно рассмотрели, как узнать ID страницы в ВК различными методами. Перейдём к некоторым выводам.

Выводы

Узнать ID страницы ВК можно абсолютно с любого устройства без каких-либо затруднений даже если номер был заменён на буквенную комбинацию. ВКонтакт построен таким образом, что окончательно потерять идентификатор страницы пользователь точно не сможет.

Видеоинструкция

Мы прикрепили подробную инструкцию в формате видео, в которой наглядно отображен процесс применения всех вышеописанных способов.

На сегодняшний день социальная сеть «ВКонтакте» насчитывает огромное количество участников. Каждый из них обладает собственным, так называемым идентификационным номером — id пользователя. Данный id в сети получает каждый человек, зарегистрировавшийся в «ВКонтакте». Этот номер нужен для того, чтобы персонализировать данные клиента. Несмотря на это, благодаря современным возможностям этой социальной сети обеспечивается не только свободное общение со всеми знакомыми, налаживание новых связей, но и тайный просмотр страниц и альбомов, которые защищены настройками приватности. Для того чтобы перейти через барьер конфиденциальности, вовсе не обязательно знать точный идентификационный номер.

Так что такое id пользователя и как его узнать? Три основных метода

На данный момент имеется несколько способов определить id любого пользователя «ВКонтакте». О них пойдет речь ниже в более подробном виде и с показательными скриншотами.

Метод работает, но не всегда

Во-первых, первым самым простым и всем знакомым способом понять, что такое id и как его узнать, является открытие странички самого пользователя в сети. Данное действие обеспечивает появление индивидуальной ссылки каждого участника социальной сети, которая содержит идентификационный номер. Например, http://vkontakte.ru/»id1234567. Цифры после букв «id» являются той самой комбинацией, которая необходима, чтобы просмотреть страницу нужного человека, которая скрыта.

Как открыть картинку?

Во-вторых, чтобы понять, что такое id пользователя сети и узнать его, необходимо знать об одном нюансе социальной сети «ВКонтакте». Данный момент препятствует появлению необходимого числового значения, потому что вместо идентификационного номера сразу же стоит буквенное значение. Такое можно встретить довольно-таки часто. Необходимо нажать на правую кнопку мыши на аватар участника vk, а затем выбрать значение, которое будет соответствовать вашему браузеру, к примеру:

. «Свойства изображения…» — Opera;

. «Свойства» — Internet Explorer;

. «Информация об изображении» — Mozilla Firefox;

. «Открыть картинку в новой вкладке» — Google Chrome.

В любом случае после нажатия на правую кнопку мыши и выбора необходимого значения, появляется один и тот же адрес аватара того или иного пользователя. Например, http://cs9230.vkontakte.ru/»u1234567″/a_a13102c7.jpg. Цифровое значение, которое находится после буквы «u» является тем самым искомым идентификационным номером. Теперь вопрос «что такое id» вас мучить не будет, да и найти его можно, даже если он скрыт. Но есть также 100%-ый метод определения этого значения, о котором написано ниже.

Самый действенный метод

В-третьих, самым доступным и достоверным способом узнать id участника «ВКонтакте», является следующее. Нужно открыть необходимую для поиска страницу. После этого нажать на «Отправить сообщение». Затем сразу же в левой части строки браузера появится идентификационный номер. Наряду с этим, благодаря нажатию на функцию «Отправить сообщение», произойдет открытие действия в окне. После этого вы сможете увидеть в адресной строке такое выражение: http://vk.com/write1234567.

ID любого пользователя можно узнать

Со временем те или иные способы устаревают, но на их место приходят другие, не менее эффективные методы того, как узнать id любого зарегистрированного участника социальной сети «ВКонтакте». Подобные интересные секреты постоянно будут всплывать вокруг данного сайта, однако не стоит «вестись» на подозрительные бесплатные программы — они могут принести вред персональному компьютеру. Помните об этом.

Id, или уникальный номер – это номер, который присваивается в социальной сети ВКонтакте каждой личной странице, паблику или группе. Это своеобразный виртуальный номер паспорта, набрав который в строке браузера, вы можете сразу попасть на нужную страницу.

Долгое время ответ на вопрос, как узнать id группы ВКонтакте, страницы друга или вообще любого человека, был предельно прост. Уникальный номер высвечивался в строке браузера сам по себе, стоило только зайти на страничку. Но с тех пор, как у пользователей ВКонтакте появилась возможность записать в своем айди вместо цифр ник, задача несколько усложнилась. Однако не настолько, чтобы ее можно было назвать трудноразрешимой.

Получить айди другого человека

В данном случае неважно, добавлен ли этот пользователь к вам в друзья или нет. Более того, не является препятствием к узнаванию id и закрытая страница.

  1. Зайдите на страницу, айди который желаете узнать. Под фотографией вы увидите кнопку «Отправить сообщение». Наведя на отправку сообщений курсор, щелкните правой кнопкой мышки. Перед вами появится список возможных действий.
  2. Выберите «Копировать адрес», нажмите на строку – она появится в буфере обмена. Теперь вы можете вставить ее, куда хотите – в адресную строку браузера или еще куда-то. Вид ссылки должен быть следующий:

http://vkontakte.ru/mail.php?act=write&to=6674084

Как вы уже, вероятно, догадались, последние цифры и являются искомым уникальным номером.

Как узнать id группы ВКонтакте

Тем же способом, как на личной странице, узнать айди группы не получится: вы скопируете адрес не с номером, а с названием группы. Но получить уникальный номер все-таки можно. Для этого есть даже два способа:

  1. На странице группы найдите какую-либо ссылку на другую страницу ВКонтакте.
  2. Либо щёлкните правой кнопкой на картинку, также размещенную на странице группы. Из списка действий выберите «Копировать». У вас появится ссылка типа:

http://cs9573.userapi.com/u85253927/-14/x_b2d46a8d.jpg

В нашем случае 85253927 – это и есть айди группы.

Как узнать id всех участников группы ВКонтакте

http://vkontakte.ru/search?c%5Bgroup%5D=3426945&c%5Bsection%5D=people

На месте цифр после знака «равно» нужно вставить айди группы, и перед вами появится список уникальных адресов всех участников сообщества.

Поиск какого-либо пользователя и информации о нем является довольно актуальной задачей в социальной сети ВКонтакте. Однако ситуация становится гораздо проще, если вам частично или полностью известен идентификатор нужного аккаунта.

Полная версия сайта ВК позволяет вам выполнять поиск пользователей различными методами, описанными нами в отдельной статье. Кроме этого, информацию о человеке можно найти по его номеру ID.

Эта инструкция позволит вам узнать информацию о владельце страницы, исходя из данных, указанных пользователем ВКонтакте — ни больше, ни меньше. Вычислить какую-либо более личную информацию через рассматриваемый ресурс невозможно.

Способ 1: Прямой переход

Как вы, должно быть, знаете, идентификатор является неотъемлемой частью прямой ссылки на страницу пользователя. Благодаря этому вы можете мгновенно перейти к нужному профилю, добавив необходимые символы в адресную строку.

Примечание: Многие страницы могут быть скрыты от глаз неавторизованных пользователей.


На этом метод можно завершить, так как информация о пользователе успешно найдена.

Способ 2: База данных

Каждый ID ВКонтакте представляет собой уникальный номер, который не может быть использован повторно даже в случае удаления страницы. При этом каждый из номеров автоматически фиксируется в базе данных сайта, доступ к которой вы можете получить по специальной ссылке.

  1. После перехода по представленной нами ссылке, сверьтесь с первыми тремя цифрами в имеющемся у вас идентификаторе. Например, в случае номера «id203966592» вам нужно кликнуть по ссылке «203 000 001 — 204 000 000» .
  2. На следующем этапе проделайте аналогичное сравнение с последующими тремя числами в номере ID. Для «id203966592» мы нажимаем по ссылке «203 960 001 — 203 970 000» .
  3. Вновь выберите значение, исходя из последней тройки чисел в идентификаторе. К примеру, в случае с «id203966592» выбираем строчку «203 966 501 — 203 966 600» .
  4. Чтобы завершить процесс вычисления пользователя, на последней представленной странице найдите точное совпадение с идентификатором. Тут же отображаются имена всех владельцев конкретных ID.
  5. Чтобы упростить поиск, нажмите на клавиатуре сочетание клавиш «Ctrl+F» и в появившееся поле вставьте идентификатор. При этом не забудьте его разделить на группы по три числа.
  6. После клика по найденной ссылке, как и в прошлом способе, вам будет представлена основная информация о пользователе.

Надеемся, рассмотренные способы помогли вам вычислить нужных людей по имеющимся номерам ID.

Мобильное приложение

Официальное мобильное приложение ВК не содержит ни адресной строки, ни каких-либо специальных разделов. Вследствие этого для вычисления человека по ID вам нужно будет скачать и установить приложение .

Единственный доступный метод является прямой альтернативой первому способу из предыдущего раздела данной статьи, требуя от вас минимального количества действий. При этом вам необходимо безошибочно знать идентификатор нужной страницы.

  1. Запустив приложение, через главное меню откройте один из стандартных разделов и на верхней панели кликните по значку с тремя вертикально расположенными точками. Чтобы открылось нужное меню, на верхней панели должна находиться подпись «Kate Mobile» .
  2. Из представленного списка разделов выберите пункт «Открыть ссылку» .
  3. В появившееся текстовое поле вставьте идентификатор или логин нужного пользователя, сохраняя его правильную форму.
  4. После этого нажмите кнопку «ОК» , чтобы открыть страницу пользователя.
  5. На следующем этапе вы можете ознакомиться со всей интересующей вас информацией о владельце страницы. Тут же заметьте, что в отличие от официального приложения, Kate Mobile предоставляет значительно больше данных.
  6. Для получения подробных сведений вам нужно будет открыть вкладку «Интересы» .

Прочую информацию вы сможете узнать самостоятельно, детально изучив прочие разделы в профиле человека. Мы же заканчиваем описание этого способа и статью в целом.

Сегодня мы поговорим о том, как узнать ID любой страницы ВКонтакте.

Для тех, кто не в курсе:

ID страницы Вконтакте это уникальный идентификационный номер любого аккаунта, зарегистрированного в соцсети , а также пабликов, групп, постов и даже фотографий с видеозаписями в ней.

«Айди» всегда присваивается при создании чего-либо ВКонтакте. Изменить его нельзя — разве что сменить адрес страницы на «человекопонятный», например, vk.com/smeshnye.kotiki . Однако и в этом случае ID страницы не меняется, он лишь делается скрытым.

Вот как выглядят различные идентификаторы Вконтакте:

  • профиль пользователя — vk.com/id 78563931
  • паблик — vk.com/public 13675315
  • группа — vk.com/club 2505625
  • встреча — vk.com/event 4552624

Где цифры в конце — это и есть ID.

Самый простой способ узнать id у друга — это открыть нужный аккаунт в браузере и посмотреть на адресную строку, точнее, на цифры, которые идут после https://vk.com/id

Однако бывает, что ID оказывается скрытым, потому что человек успел поменять в настройках адрес своей страницы на удобный ему короткий — к примеру, «meowmeow1 » вместо обычных цифр.

Что делать в таком случае?

Вариант первый: приложение LinkApp

Вариант второй: аватарка

Щелкните по аватарке профиля нужного человека и вновь обратите внимание на адресную строку. Цифры, которые находятся между словом «photo» и символом «_», и есть искомый номер.

Вариант третий: стена

Если вы можете смотреть записи на стене юзера и они там имеются, щелкните по дате любого поста и между словом «wall» и «_» будет нужный вам идентификатор пользователя.

Вариант четвертый: сообщения

Если вы нажмете «отправить сообщение» нужному вам человек, то при открытии диалога с пользователем вид будет такой:
https://vk.com/im?sel=295772019 или, например, такой:

Последние цифры и есть «айди».

Как узнать свой ID в Вк

Сработают все вышеперечисленные способы, и к ним добавляется еще один.

  • зайдите в меню «Настройки» вашей страницы;
  • там перейдите на вкладку «Общее»;
  • прокрутите страницу вниз до пункта «Адрес страницы»;
  • если у вас уже есть короткий адрес, просто щелкните по нему — вам предложат его изменить, а заодно покажут строку «Номер страницы — такой-то».

Как узнать ID группы, паблика или встречи Вконтакте

Здесь вы также можете сразу узнать «айди» из адресной строки, или снова наткнуться на «красивый» адрес — вместо vk.com/club106559582 , где последние цифры — искомый номер, увидите

TraPS-VarI: идентификация генетических вариантов, изменяющих сигнальные мотивы на основе фосфотирозина

Клеточные линии

3T3NIH (LGC / ATCC, # CRL-1658), линия упаковывающих клеток GP + E-86 (LGC / ATCC, # CRL-9642) и Клеточная линия тимомы мыши AKR / J BW5147 (ATCC, # TIB47), полученная из ATCC, была аутентифицирована и подтверждена как свободная от микоплазмы. Клетки культивировали в полной среде Игла, модифицированной Дульбекко, с 10% FCS.

Плазмиды

Экспрессионные конструкции на основе «спящей красавицы», а именно pCMV-SB100X и pCAG-FLT3JM40-P2A-Clover-T2A-Puro, pCAG-mCD8tm-FLT3JM40-P2A-Clover-T2A-Puro, pCAG3JM40A-Clover-MyrFLT и pCAG-myrMUT-FLT3JM40-P2A-Clover-T2A-Puro, кодирующие мотивы юкстамембранного фосфотирозина FLT3, управляемые цитомегаловирусом и промотором бета-актина курицы, соответственно, были созданы для работы с легко трансфицируемыми клетками 3T3NIH.Ретровирусная плазмида MSCV (вирус стволовых клеток мыши) pMSCVneo (Clontech, # 631461) была создана для работы с трудно трансфицируемыми линиями клеток тимомы BW5147. Для конструирования плазмид экспрессии ретровирусов, а именно pMSCVneo-FLT3JM40-P2A-Clover-T2A-Puro, pMSCVneo-mCD8tm-FLT3JM40-P2A-Clover-T2A-Puro, pMSCVneo-myrFLT3JM40-Cloveruro-T2AMne-P2A-M-40-Cloveruro-T2A-M-JM40-Cloveruro-T2A-M-1 -Clover-T2A-Puro, полицистронные вставки были созданы с использованием служб синтеза генов (Eurofins Genomics) и клонированы между сайтами EcoRI и BgII в векторе pMSCVneo.

Экспрессионные плазмиды доступны для распространения от Addgene.

Ретровирусная трансдукция клеток тимомы

Для стабильной экспрессии фосфотирозиновых мотивов в клеточных линиях BW5147 (ATCC, # TIB47) использовали упаковывающие клетки GP + E-86 (LGC / ATCC, # CRL-9642). BW5147 трансдуцировали путем совместного культивирования с прикрепленными линиями ретровриальных упаковывающих клеток GP + E-86, как описано ранее. Клетки GP + E-86 трансфицировали с использованием липофектамина 2000 (Life Science Technologies, # 11668027) ретровирусными плазмидами и отбирали пуромицином в течение недели.Перед совместным культивированием линии клевер-положительных упаковывающих клеток сортировали методом проточной цитометрии.

Проточная цитометрия

Для определения экспрессии поверхностных маркеров суспензии отдельных клеток в PBS, содержащем 0,1 мМ EDTA и 2% FCS, окрашивали следующими непосредственно конъюгированными антителами: APC антимышиным CD3 (BioLegend, Cat # 100312, Clone-134 -2C11), APC-антитело Ctrl изотипа IgG армянского хомяка (BioLegend, каталожный номер 400911, клон-HTK888), APC-антитело против CD4 мыши (BioLegend, каталожный номер 100516, клон-L3T4, T4), APC крысиный IgG2a, изотип κ Ctrl Антитело (BioLegend, каталожный номер 400511, Clone-RTK2758), антитело APC против мышиного CD8a (BioLegend, каталожный номер 100712, клон-53-6.7), APC-антитело против CD29 мыши / крысы (BioLegend, каталожный № 102215, Clone-HMβ1-1), APC-антитело против мышиного CD184 (CXCR4) (BioLegend, каталожный номер 146507, Clone-L276512), APC-антитело против мышиного CD184. Антитело CD195 (CCR5) (BioLegend, № по каталогу 107011, Clone-HM-CCR5), антитело APC против CD196 мыши (CCR6) (BioLegend, № по каталогу 129813, Clone-29-2L17), антитело APC против I-Ab мыши (BioLegend, № по каталогу 116417, Clone-AF6-120.1), мышиный IgG2a APC, антитело Ctrl изотипа κ (BioLegend, № по каталогу 400221, Clone-MOPC-173), антитело APC против CD45 мыши (eBioscience, № по каталогу 17-0451 -82, Clone-30-F11), контроль изотипа IgG армянского хомячка APC (eBioscience, Cat # 17-4888-82, Clone-eBio299Arm) и APC CD90.1 (Thy-1.1) моноклональное антитело (eBioscience, № по каталогу 17-0900-82, Clone-HIS51).

Для внутриклеточного окрашивания клетки фиксировали в 4% PFA в течение 15 минут при комнатной температуре. После однократной промывки в PBS клетки ресуспендировали в буфере для повышения проницаемости клеток (0,3% Triton X-100 в PBS, содержащем 1 мМ EDTA и 2% FCS) и инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут. После этого клетки промывали и инкубировали в буфере для повышения проницаемости клеток для последующего первичного окрашивания антител фосфотирозиновыми мышиными mAb (Cell Signaling Technology, № по каталогу 9416, Clone-P-Tyr-102) и HA-Tag Rabbit mAb (Cell Signaling Technology, Каталожный № 3724, Клон-C29F4).

Анализ пролиферации BrdU

Для обнаружения включения BrdU в 3T3NIH на основе проточной цитометрии линии клеток с недостатком сыворотки инкубировали в культуральной среде RPMI, содержащей 1 × BrdU. Через указанные моменты времени клетки отделяли и один раз промывали PBS. Клетки фиксировали и пропускали через 70% ледяной этанол в течение 5 минут при комнатной температуре и дважды промывали в PBS с последующей обработкой 1,5 М HCl при комнатной температуре в течение 30 минут. Промытые клетки окрашивали на BrdU с использованием мышиного антитела против BrdU (Cell Signaling, # 5292) или мышиного изотипического контроля и на ДНК с использованием йодида пропидия 10 мкг / мл.Конъюгированные с аллофикоцианином антимышиные антитела (Dianova, № 115-136-146) использовали в качестве вторичных антител и измеряли в проточном цитометре.

STAT3-зависимый анализ активности промотора

Клетки 3T3NIH (культивированные при 37 ° C, 7% CO2 в RPMI, содержащей 4,5 г / л глутамина и 10% FBS) были временно трансфицированы репортерными плазмидами Cignal STAT3 Reporter (luc) kit ( Qiagen, # CCS9028L), pTk-Renilla и плазмиды pCAG-FLT3JM40-P2A-Clover-T2A-Puro, pCAG-mCD8tm-FLT3JM40-P2A-Clover-T2A-Puro, pCAG-myrFLT3JM40-Clover-MyrMUT2A -FLT3JM40-P2A-Clover-T2A-Puro с использованием липофектамина 2000 (Life Science Technologies, № 11668027).Люциферазу измеряли с помощью системы анализа люциферазы Dual Glo (Promega, # E1910) в соответствии с инструкциями производителя. Вкратце, к клеткам добавляли реагент Dual Glo Luciferase и после инкубации в течение 10 минут измеряли активность люциферазы светлячков с помощью люминометра (EG&G Berthold Technologies, LB96v). Реакции останавливали обработкой в ​​течение 10 минут Dual-Glo Stop и Glo Reagent, а затем измеряли активность люциферазы renilla. Для некоторых образцов, для которых требовалась повышенная чувствительность, использовали прототип набора Nano-Glo Dual Luciferase Reporter Assay Prototype Kit (Promega, # N1110).

Источники данных и импорт данных

Во всех случаях данные были получены из первичных источников и проанализированы с помощью python в файл с разделителями табуляции, а затем импортированы в MySQL (для TraPS-VarI) и базу данных sqlite (для базы данных TraPS-VarI) Браузер) с интерпретатором Python. Были использованы следующие базы данных; Эталонная последовательность NCBI (RefSeq) 23 , Universal Protein Resource (UniProt) 24 , проект 1000 Genomes 52 , база данных однонуклеотидного полиморфизма (dbSNP) 25 , база данных Ensembl Variation 53 , NHLBI Exome Sequencing Project ( ESP) 54 , Международный проект HapMap 55 , Консорциум агрегации экзома (ExAC) 36 , Национальный институт рака (NCI) — 60 клеточных линий 56 , Энциклопедия линий раковых клеток (CCLE) 57 , Каталог Соматические мутации при раке (COSMIC) 58 , Атлас генома рака (TCGA), AmbryShare (Ambry Genetics), Проект по секвенированию генома Скриппса Wellderly 59 , Гарвардский проект персонального генома 60 , DrugBank 26 , База данных терапевтических целей (TTD) 27 и репозиторий ClinicalTrials.Записи о лекарствах, соответствующие UniProt Entry, были импортированы в базу данных TraPS-VarI MySQL.

Сравнительный анализ рака и здоровых когорт

Чтобы продемонстрировать полезность TraPS-VarI для идентификации новых вариантов мембранных белков, данные когорт AmbryShare и Wellderly были преобразованы в формат файла vcf для анализа с помощью TraPS-VarI через командную строку. Сравнение результатов, основанных на частотах аллелей в соответствующих когортах, выявило несколько интересных вариантов мембранных белков, которые потенциально уникальны для больных раком.

Реализация

TraPS-VarI построен на Python с MySQL в качестве основного хранилища данных. Веб-приложение построено на платформе Django, размещенной на веб-сервере Nginx-Gunicorn на сервере под управлением Ubuntu server16.04. Веб-приложение TraPS-VarI Database Browser собирает данные о генетических вариациях и накладывает информацию об аминокислотных изменениях на диаграмму топологии мембранных белков.

Access

Веб-интерфейс TraPS-VarI позволяет анализировать набор данных генотипа человека, ориентированный на мембранный белок, с помощью простой кнопки отправки в один шаг.Электронная почта является необязательной, если длительное время ожидания не вызывает беспокойства. Статус представленного анализа можно проверить, вставив JobID. На странице результатов, отправленных по электронной почте, указаны все генетические аллели для индивидуальных мембранных белков в табличном формате. Кроме того, в сортируемой таблице отображаются вкладки для записей DrugBank и терапевтической целевой базы данных для соответствующих записей UniProt. Форма «Поиск» позволяет предварительно фильтровать результаты. Результаты могут быть загружены в виде файла с разделителями табуляции или скопированы в буфер обмена для вставки в подходящий редактор.Результаты можно повторно проанализировать для получения дополнительной информации, такой как частоты аллелей и клинические испытания конкретных белков-мишеней, щелкнув «отправить в FreqInPop» или «отправить в TargetOnTrials» соответственно. Генетические вариации в агрегаторе мембранных белков Браузер базы данных TraPS-VarI представляет собой веб-интерфейс для просмотра спектра изменений последовательности белков, отображаемых путем наложения на диаграмму топологии. Гиперссылки аминокислот отображают информацию об аллелях, специфичную для базы данных, включая присутствие тирозиновых мотивов, проксимальных к мембране.

Статистика

Статистический анализ проводился с использованием программного обеспечения Prism (GraphPad Prism). Биологические реплики и реплики измерений указаны в соответствующих подписях к рисункам и в статистических методах. Для двухгрупповых сравнений использовался непарный t-критерий. Все значения P двусторонние; критерий статистической значимости — P <0,05. Значения P <0,05, P <0,001, P <0,0001 и P <0,00001 обозначены *, **, *** и **** соответственно. Все данные представлены как средние значения ± s.d.

Может ли кто-нибудь украсть вашу личность из ваших водительских прав?

В Центре ресурсов по краже личных данных (ITRC) наш обученный персонал обрабатывает около 1000 новых дел жертв каждый месяц. Один из распространенных вопросов, которые задают нашим экспертам-консультантам, — что может случиться, если водительские права попадут в руки потенциального похитителя личных данных.

Как можно получить информацию из моих водительских прав?
  • Кто-то украл физическую лицензию или изображение лицензии.Имея водительские права или фотографию, похититель личных данных имеет прямой доступ к вашему полному имени, номеру водительских прав, дате рождения и другой личной информации.
  • Номер лицензии раскрывается в результате утечки данных или компрометации. С 2017 года информация о водительских правах более 150 миллионов водителей в США была взломана в результате утечки данных или невозможности защитить базу данных. Для получения дополнительной информации об этих событиях, связанных с данными, посетите инструмент отслеживания утечек данных ITRC , уведомленный .Вы можете просмотреть информацию о последних публичных сообщениях о компрометации данных, которые влияют на потребителей и компании.

Как кто-то может использовать мою лицензию для кражи личных данных?

В некоторых случаях он используется для поддельных удостоверений личности. производство. В других случаях он используется в качестве доказательства идентификации, часто вместе с другими частями личной информации (PII), чтобы открывать новые учетные записи, избегать нарушений правил дорожного движения или даже уклоняться от уголовного преследования.

Подробнее: Раскрытие преступления кражи личных данных

Как я могу минимизировать свои риски?

Лучше всего защитить информацию о ваших водительских правах.Не позволяйте никому сканировать или перемещать вашу лицензию, если это не требуется по закону (покупка лекарств, проверка безопасности в аэропорту и т. Д.) Или транзакция, которая требует подтверждения вашего возраста или личности, например, в баре или при подаче заявления на работу или банковский счет.

При наличии лицензии или государственного удостоверения личности утеряна или украдена, обязательно сообщите об этом в лицензионное агентство штата и спросите, какие меры следует предпринять, чтобы защитить вашу лицензию от неправомерного использования. Консультанты ITRC могут помочь вам узнать, какие шаги нужно предпринять в каждом штате.

Как узнать, использует ли кто-то мои водительские права?

Большинство жертв не узнают, что их информация использовалась, пока они не подадут заявку на новую лицензию или продление, не пройдут проверку биографических данных или не сообщат правоохранительным органам.

Если вы подозреваете, что информация о вашей лицензии была использована неправильно, выполните следующие действия:

1. Запросите официальную водительскую карту

Попросите лицензионное агентство штата предоставить копию вашего водительского удостоверения, а затем проверьте его на предмет подозрительной деятельности.Большинство штатов взимают небольшую плату за предоставление отчета.

2.

Запросите ваши кредитные отчеты

Свяжитесь с тремя основными агентствами кредитной информации (CRA) , чтобы получить копию вашего кредитного отчета, чтобы убедиться, что на ваше имя не открываются неизвестные счета.

3.

Просмотрите недавнюю проверку биографических данных или запросите новую

В соответствии с Законом о справедливой кредитной истории (FCRA) вы имеете право на получение копии любой проверки биографических данных, проводимой сторонней компанией при подаче заявления о приеме на работу.Просто спросите у представителя отдела кадров контактную информацию компании, занимающейся проверкой биографических данных.

Если у вас не было недавней проверки биографических данных, подумайте о том, чтобы связаться с авторитетной компанией по проверке биографических данных, чтобы провести самопроверку на предмет ошибок, таких как неправильные работодатели, ложные уголовные обвинения, взыскание долгов и т. Д.

Что мне делать, если я жертва?

Есть много действий, доступных вам, если ваша личность украдена с использованием ваших водительских прав.Вы можете связаться с ITRC по бесплатному телефону 888.400.5530 или пообщаться с экспертом-консультантом на веб-сайте компании. Мы создадим индивидуальный план устранения кражи личных данных с конкретными действиями, которые вы можете предпринять с учетом вашей уникальной ситуации.

Сообщение было первоначально опубликовано 9.10.13 и обновлено 19.02.21.


Морфология, организация генома, репликация и патогенез тяжелого острого респираторного синдрома Коронавирус 2 (SARS-CoV-2)

Коронавирусная болезнь 2019 (COVID-19).2020: 23–31.

Приглашенный редактор (ы): Шайлендра К. Саксена

Центр перспективных исследований, Медицинский университет Короля Джорджа, Лакхнау, Индия

, 3 , 3 , 3 и 4

Сватантра Кумар

3 Центр перспективных исследований (CFAR), медицинский факультет, Медицинский университет короля Джорджа (KGMU), Лакхнау, Индия

Раджни Ньоду

3 Центр перспективных исследований (CFAR), медицинский факультет, King George’s Медицинский университет (КГМУ), Лакхнау, Индия

Вимал К.Маурья

3 Центр перспективных исследований (CFAR), медицинский факультет, Медицинский университет короля Джорджа (KGMU), Лакхнау, Индия

Шайлендра К. Саксена

4 Центр перспективных исследований (CFAR) — стволовые клетки / Подразделение клеточных культур, медицинский факультет Медицинского университета короля Джорджа (KGMU), Лакхнау, Индия

3 Центр перспективных исследований (CFAR), медицинский факультет Медицинского университета короля Джорджа (KGMU), Лакхнау, Индия

4 Центр перспективных исследований (CFAR) — Отделение стволовых клеток / клеточных культур, Медицинский факультет, Медицинский университет Короля Джорджа (KGMU), Лакхнау, Индия

Автор, отвечающий за переписку.Авторские права © Редакторы (если применимо) и Автор (ы) по исключительной лицензии Springer Nature Singapore Pte Ltd. 2020

Эта статья доступна через PMC Open Access Subset для неограниченного повторного использования в исследованиях и вторичного анализа. в любой форме и любыми средствами с указанием первоисточника. Эти разрешения предоставляются на период, пока Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) объявила COVID-19 глобальной пандемией.

Abstract

SARS-CoV-2 представляет собой одноцепочечный РНК-вирус с размером генома ~ 30 т.п.н., который принадлежит к роду Coronavirus и семейству Coronaviridae .SARS-CoV-2 появился недавно и был объявлен Всемирной организацией здравоохранения пандемией. Геномная характеристика SARS-CoV-2 показала, что он имеет зоонозное происхождение. Обнаружено, что структура SARS-CoV-2 аналогична SARS-CoV с размером вириона от 70 до 90 нм. Спайковые, мембранные и поверхностные вирусные белки оболочки коронавируса встроены в полученный из мембраны липидный бислой хозяина, инкапсулирующий спиральный нуклеокапсид, содержащий вирусную РНК. Геном состоит из 6-11 открытых рамок считывания (ORF) с 5′- и 3′-фланкирующими нетранслируемыми областями (UTR).Вариация последовательностей между SARS-CoV-2 и SARS-CoV не выявила существенных различий в ORF и nsps. Nsps включает две вирусные цистеиновые протеазы, включая папаин-подобную протеазу (nsp3), химотрипсиноподобную, 3C-подобную или основную протеазу (nsp5), РНК-зависимую РНК-полимеразу (nsp12), геликазу (nsp13) и другие, которые могут быть участвует в транскрипции и репликации SARS-CoV-2. Структура шипового гликопротеина SARS-CoV-2 напоминает структуру шипового белка SARS-CoV со среднеквадратичным отклонением (RMSD) 3.8 Å. Как и SARS-CoV, SARS-CoV-2 использует рецептор ACE2 для интернализации и сериновые протеазы TMPRSS2 для примирования белка S. Гистопатологическое исследование тканей пациентов, инфицированных SARS-CoV-2, показало вирус-индуцированный цитопатический эффект с признаками острого респираторного дистресс-синдрома в клетках легких. В этой главе обсуждаются морфология, организация генома, репликация и патогенез SARS-CoV-2, что может помочь нам понять болезнь, которая может привести к идентификации эффективных противовирусных препаратов и вакцин.

Ключевые слова: SARS-CoV-2, геном, спайковый гликопротеин, ACE2, вход, репликация, патогенез

Введение

Коронавирусы (CoV) представляют собой оболочечные одноцепочечные вирусы с положительной смысловой РНК, которые принадлежат к семейству Coronaviridae . На основе геномной организации и филогенетического родства коронавирусы были классифицированы в подсемейство Coronavirinae , которое состоит из четырех родов: Alphacoronavirus (αCoV), Betacoronavirus (βCoV), Gammacoronavirus (γCoVirus). (δCoV) (Cui et al.2019). Анализ тенденций эволюции коронавирусов показал, что αCoV и βCoV произошли от летучих мышей и грызунов, а γCoV и δCoV — от видов птиц (Ge et al., 2017). Способность CoV преодолевать межвидовой барьер привела к появлению некоторых патогенных CoV. КоВ HKU1, NL63, OC43 и 229E связаны с легкими симптомами у людей, в то время как тяжелый острый респираторный синдром CoV (SARS-CoV) и ближневосточный респираторный синдром CoV (MERS-CoV), как известно, вызывают тяжелое заболевание (Fehr and Perlman 2015 ).В 2002–2003 годах SARS-CoV возник в Китае с 8000 клиническими случаями и 800 смертельными исходами. С 2012 года БВРС-КоВ вызывает постоянные эпидемии на Аравийском полуострове. Было обнаружено, что оба вируса происходят от летучих мышей и затем передаются в циветты промежуточных млекопитающих-хозяев в случае SARS-CoV и верблюдов в случае MERS-CoV и в конечном итоге инфицировали людей (Song et al.2019).

SARS-CoV-2 был объявлен пандемией, с 1844683 подтвержденными случаями и 117021 смертельным исходом во всем мире к 14 апреля 2020 года (Всемирная организация здравоохранения, 2020 год).Для характеристики нового коронавируса были взяты мазки из бронхоальвеолярного лаважа и мазки из горла у девяти пациентов, которые посетили Уханьский рынок морепродуктов во время первоначальной вспышки. Для выделения вируса использовали специальные свободные от патогенов эпителиальные клетки дыхательных путей человека (HAE). Собранные образцы инокулировали в клетки HAE через апикальные поверхности. Клетки HAE контролировали на предмет цитопатических эффектов, и супернатант собирали для проведения анализов RT-PCR. Апикальные образцы были собраны для секвенирования следующего поколения после трех пассажей.Полногеномные последовательности SARS-CoV-2 были созданы путем комбинации секвенирования нанопор Сэнгера, Иллюмина и Оксфорда (Лу и др., 2020). Филогенетический анализ показал, что летучие мыши могут быть источником SARS-CoV-2 (Andersen et al.2020). Кроме того, некоторые исследования показали, что происхождение SARS-CoV-2 связано с панголинами (Li et al.2020; Shereen et al.2020). Для расшифровки механизма репликации и разработки эффективных профилактических и терапевтических стратегий решающее значение имеет понимание структуры SARS-CoV-2, организации генома и репликации.Поэтому в этой главе основное внимание уделяется морфологии и структуре, геномной организации и циклу репликации SARS-CoV-2.

Морфология SARS-CoV-2

SARS-CoV-2, выделенный из образцов носоглотки и ротоглотки, инокулировали на клетки vero. Чтобы идентифицировать SARS-CoV-2, инокулированные клетки были префиксированы с использованием 2% параформальдегида и 2,5% глутарового альдегида, и была выполнена просвечивающая электронная микроскопия. Структура SARS-CoV-2 наблюдалась при исследовании инфицированных клеток через 3 дня после заражения.Электронная микроскопия выявила специфичную для коронавируса морфологию SARS-CoV-2 с размерами вирусных частиц от 70 до 90 нм, наблюдаемыми под широким спектром внутриклеточных органелл, особенно в везикулах (Park et al.2020). Из-за высокого сходства последовательностей предполагается, что структура SARS-CoV-2 такая же, как у SARS-CoV (Kumar et al.2020). Спайк, мембрана и оболочка поверхностного вирусного белка коронавируса встроены в полученный из мембраны липидный бислой хозяина, инкапсулирующий спиральный нуклеокапсид, содержащий вирусную РНК (рис.) (Finlay et al. 2004). Структура спайка (Yan et al., 2020) и протеазы SARS-CoV-2 (Zhang et al., 2020) была определена, что дает возможность разработать новый класс лекарств для лечения COVID-19.

Структура SARS-CoV-2. SARS-CoV-2 содержит поверхностные вирусные белки, а именно спайковый гликопротеин (S), который опосредует взаимодействие с рецептором ACE2 на клеточной поверхности. Гликопротеин (M) вирусной мембраны и оболочка (E) SARS-CoV-2 встроены в липидный бислой, полученный из мембраны хозяина, инкапсулирующий спиральный нуклеокапсид, содержащий вирусную РНК

Организация генома SARS-CoV-2

Размер коронавируса геном находится в диапазоне от 26 до 32 т.п.н. и включает 6-11 открытых рамок считывания (ORF), кодирующих 9680 аминокислотных полипротеинов (Guo et al.2020). Первая ORF составляет приблизительно 67% генома, который кодирует 16 неструктурных белков (nsps), тогда как остальные ORF кодируют вспомогательные и структурные белки. В геноме SARS-CoV-2 отсутствует ген гемагглютинин-эстеразы. Однако он включает две фланкирующие нетранслируемые области (UTR) на 5′-конце 265 и 3′-конце 358 нуклеотидов. Вариация последовательностей между SARS-CoV-2 и SARS-CoV не выявила существенных различий в ORF и nsps. Nsps включает две вирусные цистеиновые протеазы, включая папаин-подобную протеазу (nsp3), химотрипсиноподобную, 3C-подобную или основную протеазу (nsp5), РНК-зависимую РНК-полимеразу (nsp12), геликазу (nsp13) и другие, которые могут быть участвует в транскрипции и репликации SARS-CoV-2 (Chan et al.2020). В дополнение к nsps, четырьмя основными структурными белками являются гликопротеин спайковой поверхности (S), мембрана, белок нуклеокапсида (N), оболочка (E) и вспомогательные белки, кодируемые ORF. N-концевой гликозилированный эктодомен присутствует на N-конце M белка, который состоит из трех трансмембранных доменов (TM) и длинного C-концевого домена CT (рис.).

Геномная организация SARS-CoV-2. Размер генома коронавируса колеблется от 26 до 32 т.п.н. и состоит из 6–11 открытых рамок считывания (ORF), кодирующих полипротеин из 9680 аминокислот.Первая ORF составляет приблизительно 67% генома, который кодирует 16 неструктурных белков (nsps), тогда как остальные ORF кодируют вспомогательные и структурные белки. Nsps включает две вирусные цистеиновые протеазы, в том числе папаин-подобную протеазу (nsp3), химотрипсиноподобную, 3C-подобную или основную протеазу (nsp5), РНК-зависимую РНК-полимеразу (nsp12), геликазу (nsp13) и другие, которые могут участвовать в транскрипции и репликации SARS-CoV-2. Помимо nsps, геном кодирует четыре основных структурных белка, включая гликопротеин спайковой поверхности (S), мембрану, белок нуклеокапсида (N), оболочку (E) и дополнительные белки, такие как ORF.

Белки M и E необходимы для морфогенеза вируса. , сборка и отпочкование, тогда как гликопротеин S представляет собой гибридный вирусный белок, содержащий две субъединицы S1 и S2.Субъединица S1, которая имеет 70% идентичности последовательности с SARS-подобными CoV летучих мышей и SARS-CoV человека, включает сигнальный пептид, N-концевой домен (NTD) и рецептор-связывающий домен (RBD) (Walls et al.2020). Большинство различий было обнаружено во внешнем субдомене, который в первую очередь отвечает за взаимодействие спайка с рецептором ACE2. Эктодомен белка-шипа (1–1208 аминокислотных остатков) был клонирован, экспрессирован и кристаллизован, чтобы решить структуру гликопротеина шипа SARS-CoV-2. Структура спайкового гликопротеина SARS-CoV-2 напоминает спайковый белок SARS-CoV со среднеквадратичным отклонением 3.8 Å. Исследование также показывает, что область связывания рецептора (RBD) демонстрирует самую высокую структурную дивергенцию (Wrapp et al.2020). Субъединица S2, которая имеет 99% идентичность последовательности с SARS-подобными CoV летучих мышей и SARS-CoV человека, включает две области гептадных повторов, известные как HR-N и HR-C, которые образуют спиральные спиральные структуры, окруженные белковым эктодоменом. Было обнаружено, что белок S демонстрирует сайт расщепления фурином (PRRARS’V) на границе раздела между субъединицами S1 и S2, который процессируется во время биогенеза (Coutard et al.2020).

Вхождение и репликация SARS-CoV-2 в клетках-хозяевах

Вхождение коронавирусов в клетки-мишени зависит от связывания гликопротеина-шипа с клеточным рецептором и примирования белка S протеазами клетки-хозяина. Как и SARS-CoV, SARS-CoV-2 использует рецептор ACE2 для интернализации и сериновые протеазы TMPRSS2 для прайминга белка S (Hoffmann et al.2020). Подобно SARS-CoV, внелегочное распространение SARS-CoV-2 может наблюдаться из-за широко распространенной тканевой экспрессии рецептора ACE2.Кроме того, исследования показали, что спайковый белок SARS-CoV-2 проявляет в 10–20 раз более высокое сродство по сравнению с таковым у SARS-CoV (Wrapp et al. 2020). Связывание белка-шипа с рецептором ACE2 приводит к конформационным изменениям белка-шипа, что приводит к слиянию белка оболочки вируса с мембраной клетки-хозяина после проникновения через эндосомный путь (Coutard et al.2020; Matsuyama and Taguchi 2009). Это событие сопровождается высвобождением вирусной РНК в цитоплазму хозяина, которая подвергается трансляции и генерирует полипротеины репликазы pp1a и pp1b, которые далее расщепляются кодируемыми вирусом протеиназами на небольшие белки.Репликация коронавируса включает сдвиг рибосомной рамки во время процесса трансляции и генерирует как геномные, так и множественные копии субгеномных видов РНК посредством прерывистой транскрипции, которая кодирует соответствующие вирусные белки. Сборка вириона происходит посредством взаимодействия вирусной РНК и белка в эндоплазматическом ретикулуме (ER) и комплексе Гольджи. Эти вирионы впоследствии высвобождаются из клеток через везикулы (рис.) (Hoffmann et al. 2020).

Проникновение и репликация SARS-CoV-2 в клетках-хозяевах.Поступление SARS-CoV-2 в клетки-мишени хозяина зависит от связывания спайкового гликопротеина с клеточным рецептором ACE2 для интернализации. Интернализация приводит к отслаиванию вирусной РНК в цитоплазме, которая подвергается трансляции и генерирует полипротеины репликазы pp1a и pp1b, которые далее расщепляются кодируемыми вирусом протеиназами на небольшие белки. Репликация SARS-CoV-2 включает сдвиг рибосомной рамки во время процесса трансляции и генерирует как геномные, так и множественные копии субгеномных видов РНК путем прерывистой транскрипции, необходимой для соответствующих вирусных белков.Сборка вириона происходит посредством взаимодействия вирусной РНК и белка в эндоплазматическом ретикулуме (ER) и комплексе Гольджи. Эти вирионы впоследствии высвобождаются из клеток через везикулы посредством экзоцитоза

Патогенез SARS-CoV-2

Патологические данные пациентов, инфицированных SARS-CoV-2, очень напоминают результаты пациентов, инфицированных SARS-CoV и MERS-CoV. Проточный цитометрический анализ образцов периферической крови показал значительное снижение количества CD4 и CD8 Т-клеток, и было обнаружено, что их статус гиперактивирован, поскольку наблюдалась более высокая доля двойных положительных (HLA-DR и CD38).Быстрое прогрессирование пневмонии было замечено на рентгенограммах грудной клетки с некоторыми различиями между правым и левым легким. Было проведено гистопатологическое исследование ткани легких, печени и сердца. Биопсия легкого показала клеточный фибромиксоидный экссудат с двусторонним диффузным альвеолярным повреждением. В правом легком наблюдалась заметная десквамация пневмоцитов и образование гиалиновой мембраны, что указывает на признаки острого респираторного дистресс-синдрома (ОРДС), тогда как в левом легком наблюдался отек легких с образованием гиалиновой мембраны (Xu et al.2020). Кроме того, в обоих легких обнаружены интерстициальные мононуклеарные очаговые воспалительные инфильтраты, в которых преобладают лимфоциты (Tian et al. 2020). Внутриальвеолярные пространства были охарактеризованы многоядерными синцитиальными клетками с атипичными увеличенными пневмоцитами, проявляющими индуцированный вирусом цитопатический эффект. Биопсия печени пациентов, инфицированных SARS-CoV-2, показала умеренный микровезикулярный стеатоз и умеренную портальную и дольчатую активность, что позволяет предположить, что повреждение могло быть вызвано вирусом или вызванным лекарством.В сердечной ткани наблюдали несколько интерстициальных мононуклеарных воспалительных инфильтратов. Эти патологические изменения могут дать новое представление о патогенезе пневмонии, вызванной SARS-CoV-2, что может помочь клиницистам эффективно бороться с пациентами с COVID-19.

Выводы

Филогенетический анализ показал, что SARS-CoV-2 мог возникнуть от летучих мышей или ящеров. Структурные исследования инфицированных вирусом клеток показывают специфическую для коронавируса морфологию SARS-CoV-2 и размер вируса (70–90 нм).Размер генома SARS-CoV-2 колеблется от 26 до 32 т.п.н. и включает 6–11 ORF, в которых отсутствует ген гемагглютинин-эстеразы. Однако он состоит из 5′- и 3′-фланкирующих нетранслируемых областей (UTR). Спайковая структура гликопротеина SARS-CoV-2 напоминает спайковый белок SARS-CoV со среднеквадратичным отклонением 3,8 Å. Как и SARS-CoV, SARS-CoV-2 использует рецептор ACE2 для интернализации и сериновые протеазы TMPRSS2 для примирования белка S. Гистопатологическое исследование тканей пациентов, инфицированных SARS-CoV-2, показало вирус-индуцированный цитопатический эффект с признаками острого респираторного дистресс-синдрома в клетках легких.

Перспективы на будущее

SARS-CoV-2 возник недавно и был объявлен Всемирной организацией здравоохранения пандемией. На основе геномных последовательностей, представленных в базу данных NCBI, научное сообщество проанализировало образцы и предложило профилактические и терапевтические стратегии. Следовательно, необходимо провести исследование геномного разнообразия собранных образцов со всего мира, чтобы разработать общие эффективные методы лечения и вакцины. Кроме того, геномная характеристика помогает нам точно определить происхождение и эволюцию вируса.Расшифровка механизма репликации SARS-CoV-2 в различных клеточных моделях может помочь нам понять патогенез и определить конкретные цели для разработки эффективных противовирусных препаратов.

Благодарности

Авторы благодарны вице-канцлеру Медицинского университета короля Джорджа (KGMU), Лакхнау, Индия, за поддержку этой работы. Авторы не имеют других соответствующих аффилированных или финансовых отношений с какой-либо организацией или юридическим лицом, имеющим финансовый интерес или финансовый конфликт с предметом или материалами, обсуждаемыми в рукописи, кроме тех, которые раскрыты.

Ссылки

  • Андерсен К.Г., Рамбаут А., Липкин В.И. и др. (2020) Проксимальное происхождение SARS-CoV-2. Нат Мед 26 (4): 450–452. 10.1038 / s41591-020-0820-9 [Бесплатная статья PMC] [PubMed]
  • Чан Дж. Ф., Кок К. Х., Чжу З., Чу Х, То К. К., Юань С., Юэнь К. Ю.. Геномная характеристика нового патогенного для человека коронавируса 2019 года, выделенного от пациента с атипичной пневмонией после посещения Ухани. Emerg Microbes Infect. 2020; 9 (1): 221–236. DOI: 10.1080 / 22221751.2020.1719902. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Coutard B, Valle C, de Lamballerie X, Canard B, Seidah NG, Decroly E.Спайковый гликопротеин нового коронавируса 2019-nCoV содержит фурин-подобный сайт расщепления, отсутствующий в CoV той же клады. Antivir Res. 2020; 176: 104742. DOI: 10.1016 / j.antiviral.2020.104742. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Цуй Дж., Ли Ф., Ши З.Л. Происхождение и эволюция патогенных коронавирусов. Nat Rev Microbiol. 2019; 17 (3): 181–192. DOI: 10.1038 / s41579-018-0118-9. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Фер А.Р., Перлман С. Коронавирусы: обзор их репликации и патогенеза.Методы Мол биол. 2015; 1282: 1–23. DOI: 10.1007 / 978-1-4939-2438-7_1. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Finlay BB, See RH, Brunham RC. Исследования быстрого реагирования на возникающие инфекционные заболевания: уроки SARS. Nat Rev Microbiol. 2004. 2 (7): 602–607. DOI: 10,1038 / nrmicro930. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Ge XY, Yang WH, Zhou JH, Li B, Zhang W, Shi ZL, Zhang YZ. Обнаружение альфа- и бета-коронавирусов у грызунов из Юньнани, Китай.Вирол Дж. 2017; 14 (1): 98. DOI: 10.1186 / s12985-017-0766-9. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Guo YR, Cao QD, Hong ZS, Tan YY, Chen SD, Jin HJ, Tan KS, Wang DY, Yan Y. Происхождение, передача и клинические проявления терапии в связи со вспышкой коронавирусного заболевания 2019 г. (COVID-19) — обновленная информация о статусе. Mil Med Res. 2020; 7 (1): 11. DOI: 10.1186 / s40779-020-00240-0. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Hoffmann M, Kleine-Weber H, Schroeder S, Krüger N, Herrler T., Erichsen S, Schiergens TS, Herrler G, Wu NH, Nitsche A, Müller MA, Drosten C, Pöhlmann S (2020) Вход в клетки SARS-CoV-2 зависит от ACE2 и TMPRSS2 и блокируется клинически доказанным ингибитором протеазы.Ячейка 181: 1–10. 10.1016 / j.cell.2020.02.052. [Epub перед печатью] [Бесплатная статья PMC] [PubMed]
  • Кумар С., Маурья В.К., Прасад А.К. и др. Структурные, гликозилированные и антигенные вариации между новым коронавирусом 2019 года (2019-nCoV) и вирусом коронавируса SARS (SARS-CoV) VirusDis. 2020; 31 (1): 13–21. DOI: 10.1007 / s13337-020-00571-5. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Li X, Zai J, Zhao Q, Nie Q, Li Y, Foley BT, Chaillon A (2020) История эволюции, потенциальное промежуточное животное-хозяин и кросс -видовой анализ SARS-CoV-2.J Med Virol 2020: 1–10. 10.1002 / jmv.25731 [Бесплатная статья PMC] [PubMed]
  • Лу Р, Чжао X, Ли Дж., Ниу П, Ян Б., Ву Х, Ван В., Сонг Х, Хуан Б., Чжу Н., Би Й, Ма Х , Zhan F, Wang L, Hu T, Zhou H, Hu Z, Zhou W, Zhao L, Chen J, Meng Y, Wang J, Lin Y, Yuan J, Xie Z, Ma J, Liu WJ, Wang D, Xu В., Холмс ЕС, Гао Г.Ф., Ву Г., Чен В., Ши В., Тан В. Геномная характеристика и эпидемиология нового коронавируса 2019 года: последствия для происхождения вируса и связывания с рецептором. Ланцет. 2020; 395 (10224): 565–574. DOI: 10.1016 / S0140-6736 (20) 30251-8. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Мацуяма С., Тагучи Ф. Двухступенчатые конформационные изменения гликопротеина оболочки коронавируса, опосредованные связыванием рецепторов и протеолизом. J Virol. 2009. 83 (21): 11133–11141. DOI: 10.1128 / JVI.00959-09. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Park WB, Kwon NJ, Choi SJ, Kang CK, Choe PG, Kim JY, Yun J, Lee GW, Seong MW, Kim NJ, Seo JS, О, МД. Выделение вируса от первого пациента с SARS-CoV-2 в Корее.J Korean Med Sci. 2020; 35 (7): e84. DOI: 10.3346 / jkms.2020.35.e84. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Шерин М.А., Хан С., Казми А., Башир Н., Сиддик Р. Инфекция COVID-19: происхождение, передача и характеристики коронавирусов человека. J Adv Res. 2020; 24: 91–98. DOI: 10.1016 / j.jare.2020.03.005. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Song Z, Xu Y, Bao L, Zhang L, Yu P, Qu Y, Zhu H, Zhao W, Han Y, Qin C (2019) From SARS и MERS, привлекающие внимание к коронавирусу.Вирусы. 11 (1). pii: E59. 10.3390 / v11010059 [Бесплатная статья PMC] [PubMed]
  • Tian S, Hu W, Niu L, Liu H, Xu H, Xiao SY (2020) Легочная патология пневмонии, вызванной новым коронавирусом (COVID-19) на ранней стадии 2019 г. пациенты с раком легких. J Thorac Oncol. pii: S1556-0864 (20) 30132-5. 10.1016 / j.jtho.2020.02.010. [Epub перед печатью] [Бесплатная статья PMC] [PubMed]
  • Walls AC, Park YJ, Tortorici MA, Wall A, McGuire AT, Veesler D (2020) Структура, функция и антигенность шипа SARS-CoV-2 гликопротеин.Ячейка 180: 1–12. 10.1016 / j.cell.2020.02.058
  • Всемирная организация здравоохранения (2020) Ситуационный отчет по коронавирусной болезни 2019 (COVID-19) — 85. Всемирная организация здравоохранения. https://www.who.int/docs/default-source/coronaviruse/situation-reports/20200414-sitrep-85-covid-19.pdf?sfvrsn=7b8629bb_4. По состоянию на 14 апреля 2020 г.
  • Wrapp D, Wang N, Corbett KS, Goldsmith JA, Hsieh CL, Abiona O, Graham BS, McLellan JS. Крио-ЭМ структура спайка 2019-нКоВ в конформации до слияния. Наука. 2020; 367 (6483): 1260–1263.DOI: 10.1126 / science.abb2507. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
  • Xu Z, Shi L, Wang Y, Zhang J, Huang L, Zhang C, Liu S, Zhao P, Liu H, Zhu L, Tai Y, Bai C, Gao T, Song J, Xia P, Dong J, Zhao J, Wang FS (2020) Патологические находки COVID-19, связанные с острым респираторным дистресс-синдромом. Ланцет Респир Мед 8 (4): 420–422. 10.1016 / S2213-2600 (20) 30076-X. [Epub перед печатью] [Бесплатная статья PMC] [PubMed]
  • Yan R, Zhang Y, Li Y, Xia L, Guo Y, Zhou Q (2020) Структурная основа для признания SARS-CoV-2 полным -длина человеческого ACE2.Science 367 (6485): 1444–1448. 10.1126 / science.abb2762 [Бесплатная статья PMC] [PubMed]
  • Zhang L, Lin D, Sun X, Curth U, Drosten C, Sauerhering L, Becker S, Rox K, Hilgenfeld R (2020) Кристаллическая структура SARS-CoV -2 основная протеаза является основой для создания улучшенных ингибиторов α-кетоамида. Наука. pii: eabb3405. 10.1126 / science.abb3405 [Бесплатная статья PMC] [PubMed]

(PDF) Методы обнаружения фейковых аккаунтов в социальной сети VK

342 978-1-6654-0476-1 / 21 / $ 31.00 © 2021 IEEE

Методы обнаружения фейковых аккаунтов в социальной сети

VK

Алексей Д. Фрунзе

Национальный исследовательский ядерный университет МИФИ

(Московский инженерно-физический институт)

Москва, Россия

Frunzemail11. com

Алексей Александрович Фролов

Национальный исследовательский ядерный университет МИФИ

(Московский инженерно-физический институт)

Москва, Россия

aleksey2093 @ outlook.com

Аннотация. В данной статье рассматривается проблема обнаружения поддельных учетных записей пользователей

в социальных сетях. Цель исследования

найти и проанализировать отличительные особенности поддельных аккаунтов в

сравнении с аккаунтами реальных пользователей на примере

социальной сети ВКонтакте. Во введении рассматриваются различные исследования

по этой теме, включая возможность выявления поддельных учетных записей

в других социальных сетях.Экспериментальная часть описывает процесс

сбора информации об аккаунтах фейковых пользователей

из социальной сети ВКонтакте, выделение особенностей, составление набора данных

для обучения классификатора. Результаты

показывают точность обнаружения поддельных аккаунтов и сравнение результатов

различных методов классификации. В заключении представлены

выводов об эффективности и возможностях предложенного подхода

.

Ключевые слова: социальные сети; не настоящие; машинное обучение; VK

I. ВВЕДЕНИЕ

Социальные сети сегодня широко распространены. Они используются как

для общения, обучения, знакомства с новыми людьми [1], так и

для бизнеса и рекламы [2]. Одна из проблем социальных сетей

— это фейковые аккаунты, которые используются для различных анонимных действий

. Поддельные аккаунты могут использоваться как для

обмана, шантажа и вымогательства, что отрицательно сказывается на доверии

людей друг к другу в социальных сетях, так и для

распространения фейковых новостей [3], вербовки в террористические организации

и доведения людей до самоубийство [4].Однако следует отметить

, что поддельные учетные записи используются не только для нанесения вреда, но и для

различных личных целей, не затрагивающих обычных пользователей, но

таких учетных записей мешают исследователям, работающим в области социальной сети

анализ [5]. В связи с этим было решено,

в рамках данной работы провести исследование

по выявлению фейка в социальной сети ВКонтакте.

II.ЗАДАЧА

В исследовании [6] исследуются методы подсчета

фейковых аккаунтов в социальной сети Instagram. Авторы

выделяют ключевые особенности фальшивых учетных записей и обучают различные классификаторы

: метод случайного леса, J48, машину опорных векторов,

RBF, MLP, наивный байесовский классификатор, дерево Хеффдинга, упакованное дерево решений

. По результатам обучения наиболее точным методом стало упакованное дерево решений

, его точность

составила 98.45%. MLP, метод случайного леса и дерево Хеффдинга

также показали хорошие результаты. Все они показали точность

более 96%.

Авторы исследования [7] предложили метод

обнаружения фейковых аккаунтов в социальной сети Twitter. Наивный байесовский классификатор

используется для успешного вычисления подделок. Авторы

также использовали предварительную обработку данных с использованием метода Entropy

Minimization Discretization (EMD).Для успешного расчета

исследование выявляет 16 различных признаков поддельных учетных записей

. В результатах исследования сравниваются два результата классификации

: с предварительной обработкой данных и без нее. Точность расчета

без использования EMD составила 86,1%, а с этим методом

90,9%.

Авторы [8] провели исследование по подсчету

поддельных аккаунтов в социальных сетях с использованием Черного списка. Исследование

проводилось на основе социальной сети Twitter.Авторы анализируют

текста на страницах фейковых аккаунтов и на основе анализа

добавляют слова в Черный список. Точность этого метода

составила 95,4%.

В статье [5] было проведено исследование социальной сети

ВКонтакте, в рамках которого были рассчитаны фейковые аккаунты

. В работе определены ключевые признаки,

и обучен классификатор.Для классификации

использовался метод случайного леса. Из

преимуществ этого метода следует отметить, что алгоритм

не чувствителен к ненужным переменным и не требует преобразования данных

. Из минусов авторы отмечают тенденцию

метода к переобучению. По результатам классификации

точность расчета составила 92%.

Также было проведено несколько исследований по подсчету фейков

на базе социальной сети Facebook.

В [9] было проанализировано 12 методов машинного обучения. Методы

с точностью более 75%: J48, метод случайного леса

, метод случайного дерева, наивный байесовский классификатор

и другие.

В [10] рассматривался алгоритм Facebook, который

вычисляет и блокирует фейковые аккаунты. В исследовании отмечается, что алгоритм

обучается на лету и становится все более успешным при блокировании поддельных учетных записей

.

III. ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Целью данного исследования является поиск метода

для успешного расчета поддельных учетных записей с использованием методов машинного обучения. Для

это было необходимо:

1. Проанализировать возможности и особенности социальной сети ВКонтакте

2. Изучить возможности, предоставляемые API ВКонтакте [11]

3. Проанализировать фейковые аккаунты и выделить признаки для дальнейшего расчета

2021 Конференция молодых исследователей в области электротехники и электроники IEEE (ЭльКонРус) | 978-1-6654-0476-1 / 20/31 $.00 © 2021 IEEE | DOI: 10.1109 / ElConRus51938.2021.9396670

Разрешенное лицензионное использование, ограниченное: Western Sydney University. Загружено 14 июня 2021 года в 22:29:44 UTC с IEEE Xplore. Ограничения применяются.

Управление климатическими факторами для успешного растениеводства тутового шелкопряда (Bombyx mori L.) и производства более высокого шелка: обзор

Сезонные различия в компонентах окружающей среды значительно влияют на генотипическое выражение в форме фенотипического продукта урожая тутового шелкопряда, такого как вес кокона , вес скорлупы и соотношение скорлупы кокона.Изменения условий окружающей среды изо дня в день и от сезона к сезону подчеркивают необходимость управления температурой и относительной влажностью для устойчивого производства коконов. В настоящем обзоре подробно обсуждается роль температуры и влажности на рост и развитие тутового шелкопряда, включая недавние исследования белка теплового шока. В исследовании также обсуждается влияние воздуха и света на развитие тутового шелкопряда. В дополнение к этому исследованию уделяется особое внимание роли различных факторов окружающей среды в эмбриональном развитии яйца тутового шелкопряда, показателях питания личинки тутового шелкопряда и репродуктивном потенциале шелкопряда.В исследовании также подчеркивается необходимость осторожности при прядении тутового шелкопряда и влияние температуры и влажности на параметры после кокона тутового шелкопряда. Исследование включало будущие стратегии, которые необходимо принять для управления климатическими условиями для успешного выращивания коконов. В статье 140 ссылок, связанных с данной темой.

1. Введение

Шелководство — это наука, которая занимается производством шелка путем выращивания тутового шелкопряда. Шелк называют королевой текстиля из-за его блестящего блеска, мягкости, элегантности, долговечности и свойств растяжения. Шелк был обнаружен в Китае между 2600 и 2700 годами до нашей эры.Шелк, образующийся из слюны насекомого, представляет собой натуральное волокнистое вещество, которое получают из кукольных гнезд или коконов, которые плетут личинки, известные как тутовый шелкопряд. Шелк предпочтительнее всех других типов волокон из-за его замечательных свойств, таких как водопоглощение, термостойкость, эффективность окрашивания и блеск. Факторами, в основном влияющими на физиологию насекомых, являются температура и влажность. Несмотря на значительные колебания окружающей среды, насекомые демонстрируют удивительный диапазон адаптации к изменяющимся условиям окружающей среды и поддерживают внутреннюю температуру и содержание воды в допустимых пределах.Адаптация — это сложное и динамичное состояние, которое сильно различается от вида к виду. Выживание насекомых в изменяющейся среде зависит от расселения, выбора среды обитания, модификации среды обитания, взаимоотношений с водой, устойчивости к холоду, диапаузы и скорости развития, чувствительности к сигналам окружающей среды и синтеза различных молекул криопротекторов. Тутовый шелкопряд ( Bombyx mori L.) очень хрупок, очень чувствителен к колебаниям окружающей среды и неспособен пережить экстремальные естественные колебания температуры и влажности из-за долгих лет одомашнивания с 5000 лет.Таким образом, способность к адаптации тутового шелкопряда к условиям окружающей среды сильно отличается от таковой у дикого тутового шелкопряда и других насекомых. Температура, влажность, циркуляция воздуха, газы, свет и т. Д. Демонстрируют значительное взаимодействие в своем влиянии на физиологию тутового шелкопряда в зависимости от комбинации факторов и стадий развития, влияющих на рост, развитие, продуктивность и качество шелка.

Тутовый шелкопряд — одно из самых важных домашних насекомых, которое производит роскошную шелковую нить в форме кокона, поедая листья тутового дерева в личиночный период.На рост и развитие тутового шелкопряда большое влияние оказывают условия окружающей среды. Биологические, а также связанные с коконом признаки зависят от температуры окружающей среды, сезонов выращивания, качества листьев тутового дерева и генетической конституции штаммов тутового шелкопряда. Разные сезоны влияют на продуктивность Bombyx mori L. Сезонные различия в компонентах окружающей среды значительно влияют на генотипическое выражение в форме фенотипических продуктов, таких как вес кокона, вес скорлупы и соотношение скорлупы кокона.Изменения в условиях окружающей среды за последнее десятилетие подчеркивают необходимость управления температурой и относительной влажностью для устойчивого производства коконов. Индия занимает удобное второе место в мире по производству шелка после Китая. Традиционно шелководство в Индии практикуется в тропических регионах, таких как Карнатака, Тамил Наду, Андхра-Прадеш и Западная Бенгалия, и в ограниченной степени в регионах с умеренным климатом Джамму и Кашмир. Существующие тропические условия предоставляют возможности для использования мультивольтинных х бивольтинных гибридов в коммерческих целях, поскольку они очень выносливы и обладают огромной способностью выживать и воспроизводиться в изменчивых климатических условиях окружающей среды.Основная доля производства шелка (95%) приходится на поливольтинные гибриды. Исследователи [1] оценили генетический потенциал поливольтинного шелкопряда и определили подходящих родителей для программ разведения. Однако качество шелка, произведенного из поливольтинного штамма, находится на низком уровне по сравнению с существующими международными стандартами. На Китай приходится более 80% мирового производства шелка, а на Индию, которая является вторым по величине производителем, приходится около 15-16% от общего объема производства.Китайский шелк высшего качества, так как он бивольтинный. Учитывая эти недостатки, внедрение бивольтинного шелководства стало необходимым и неизбежным, учитывая его потенциал даже в тропических условиях Индии. В этой линии было разработано множество продуктивных и качественно превосходящих бивольтинных гибридов с использованием японских коммерческих гибридов в качестве материала для селекции. Однако жаркие климатические условия, преобладающие, особенно летом, не способствуют выращиванию этих высокоурожайных бивольтинных гибридов в течение всего года.Это общепризнанный факт, что в тропических условиях, в отличие от поливольтинов, бивольтины более уязвимы к различным стрессам, таким как жаркие климатические условия тропиков, плохое качество листьев и неправильное выращивание тутового шелкопряда летом, что не способствует выращиванию бивольтинов для технологически и экономически бедные фермеры Индии [2–4]. В этой статье обсуждается роль различных факторов окружающей среды, влияющих на рост, выживаемость, продуктивность и заболеваемость тутового шелкопряда.В документе также обсуждаются оптимальные условия факторов окружающей среды, необходимые для более высокой продуктивности в шелководстве, и, кроме того, в документе также рассматриваются результаты и выводы различных исследователей, которые изучали влияние факторов окружающей среды на рост, развитие, конверсию корма, репродуктивный потенциал и параметры посткокона тутового шелкопряда.

2. Роль температуры на рост тутового шелкопряда

Температура играет жизненно важную роль в росте тутового шелкопряда. Поскольку тутовые шелкопряды — хладнокровные животные, температура напрямую влияет на их физиологическую активность.В целом, личинки раннего возраста устойчивы к высокой температуре, что также помогает улучшить выживаемость и характеристики кокона. Температура имеет прямую связь с ростом тутового шелкопряда; широкие колебания температуры губительны для развития тутового шелкопряда. Повышение температуры увеличивает различные физиологические функции, а с понижением температуры физиологическая активность снижается. Повышенная температура во время выращивания тутового шелкопряда, особенно в поздних возрастах, ускоряет рост личинок и сокращает личиночный период.С другой стороны, при низкой температуре рост идет медленно, а личиночный период удлиняется. Оптимальная температура для нормального роста тутового шелкопряда составляет от 20 ° C до 28 ° C, а желательная температура для максимальной продуктивности — от 23 ° C до 28 ° C. Температура выше 30 ° C напрямую влияет на здоровье червяка. Если температура ниже 20 ° C, все физиологические процессы замедляются, особенно в раннем возрасте; в результате черви становятся слишком слабыми и подвержены различным заболеваниям. Требования к температуре на ранних стадиях (I, II, III) высоки, черви активно питаются, очень интенсивно растут и приводят к высокой скорости роста.Такие сильные черви могут лучше противостоять даже в неблагоприятных условиях в более поздних возрастах. Оптимальная температура, необходимая для выращивания тутовых шелкопрядов разных ранних возрастов, указана в таблице 1.

9055 24 ° C


Факторы окружающей среды
Инкубация I возраст III возраст IV возраст V возраст Прядение Сохранение кокона

Температура 25 ° C 28 ° C 27 ° C 26 ° C 25 ° C 25 ° C
Относительная влажность 75–80% 85–90% 85% 80% 70–75% 65–70 % 70% 80%

Обычно температура в помещении низкая зимой и в сезон дождей, что необходимо регулируется путем обогрева помещения электрическими обогревателями или углями.Электрические нагреватели с терморегулятором являются лучшими, поскольку они не выделяют вредных газов. Когда электричество становится дорогим и недоступным во многих сельских районах пояса шелководства, можно использовать правильно высушенный древесный уголь. Однако углекислый газ и другие газы, выделяемые в этом процессе горения, вредны для шелкопряда, и их можно регулировать путем обеспечения большей вентиляции, особенно в дневное время. Кроме того, двери и окна следует держать закрытыми, особенно в ночное время. В конце дня, когда температура на улице повышается, следует открывать двери и окна, чтобы в комнату попал теплый воздух.В летний сезон, когда дневная температура высока, все окна должны быть открыты. Одновременно в жаркие дни окна и двери накрывают мокрой тканью, чтобы снизить температуру и повысить влажность [5, 6]. В противном случае для этой цели можно использовать подходящие воздухоохладители.

Успех шелководства зависит от нескольких переменных, но особое значение имеют условия окружающей среды, такие как биотические и абиотические факторы. Среди абиотических факторов температура играет важную роль в росте и продуктивности шелкопряда [7, 8].Существует множество литературы, в которой утверждается, что коконы хорошего качества производятся в диапазоне температур 22–27 ° C и что качество коконов ниже этих уровней [9, 10]. Однако известно, что поливольтинные породы, выращенные в тропических странах, переносят немного более высокую температуру и приспосабливаются к тропическим климатическим условиям [11]. Чтобы использовать бивольтинные расы в тропической стране, такой как Индия, необходимо иметь стабильный коконный урожай в условиях высокой температуры. Высокая температура отрицательно влияет почти на все биологические процессы, включая скорость биохимических и физиологических реакций [12], и в конечном итоге может повлиять на качество или количество коконов тутового шелкопряда, а затем и на производимый шелк.Несколько исследований [13–15] показали, что тутовые шелкопряды более чувствительны к высокой температуре на четвертой и пятой стадиях. Хорошо известно, что большинство экономически важных генетических признаков тутового шелкопряда носят качественный характер и что на фенотипическое выражение сильно влияют факторы окружающей среды, такие как температура, относительная влажность, свет и питание [16–23]. Рисунки 1 (a), 1 (b), 1 (c), 1 (d) и 1 (e) описывают вклад различных факторов, таких как экологические, расовые и другие факторы, на важные черты кокона.Цифры показывают, что урожай кокона и его способность наматывать наиболее подвержены влиянию неблагоприятных факторов окружающей среды. Продолжительность периода 1-го возраста личинок тутового шелкопряда увеличивалась за счет снижения температуры на 10 дней [24]. Точно так же исследователи [25] обнаружили, что температура и относительная влажность оказывают синергетическое влияние на период личинок тутового шелкопряда. Эти результаты согласуются с результатами более ранних авторов [26] и сообщают, что изменение температуры вместе с относительной влажностью оказывает заметное влияние на период линьки.Точно так же в отчетах различных исследователей [27, 28] зафиксировано, что снижение температуры увеличивает продолжительность линьки тутового шелкопряда. В таблице 2 показано влияние разной температуры в поздних возрастах на различные характеристики кокона тутового шелкопряда. В ходе серьезного эксперимента исследователи [29] обнаружили, что устойчивость к высокой температуре является наследственным признаком и что возможно вывести расы шелкопряда, устойчивые к высокой температуре. В нескольких исследованиях, проведенных разными исследователями [30–32], сообщается, что количественные характеристики шелкопряда в известной среде имеют огромное значение для шелководства.Изучено влияние низких температур во время выращивания на некоторые признаки племенных рас [33]. Точно так же исследования селекционеров тутового шелкопряда [34, 35] показали, что низкая температура всегда лучше, чем более высокая, в отношении продуктивности шелкопряда и продолжительности жизни личинок для разных возрастов. В другом исследовании сообщается, что бивольтиновые гибриды F1 более приспособлены к высокой температуре и высокой влажности по сравнению с их родителями [36]. В важном обзоре ученые [37] также сообщили, что температура и относительная влажность были среди различных факторов, влияющих на рост, поведение и возрастные периоды личинок тутового шелкопряда, и обсудили адаптацию насекомых к различным условиям окружающей среды.Акклиматизация рас тутового шелкопряда к условиям окружающей среды, особенно к температуре, была подробно изучена [38]. Изучено сезонное воздействие на тутового шелкопряда в условиях Кашмира и субтропиков [39]. Различные рабочие продемонстрировали влияние влажности во время выращивания и ее роль на заболеваемость [40]. Подходящие выносливые бивольтинные расы эволюционировали и были испытаны в полевых условиях летом и в сезон дождей в Уттарпрадеше, Индия [41]. Недавно было изучено влияние различных сезонов, таких как лето, дождь и зима, на характеристики коконов и зерновых культур у популярных бивольтинных рас Индии, и был сделан вывод, что температура и влажность влияют на все характеристики этих рас [42].Высокая температура влияет почти на все биологические процессы, включая скорость биохимических и физиологических реакций [43], в конечном итоге влияя на качество и количество коконных культур.

9055 9055 9055 9055 9055 9055 9055

Характеристики Температура ° C Контроль (24 ° C)
36–22 36–22 32–22 32–26

Образование (%) 86.00 66,10 92,50 91,40 95,0
Вес кокона [г] 1,58 1,62 1,96 1,84 2,10 0,337 0,470 0,441 0,480

Источник, Суреш Кумар и др. [45].

Производство шелковых коконов определяется различными факторами, включая окружающую среду и генотип тутового шелкопряда.На рисунке 2 показано влияние генетических факторов и факторов окружающей среды на рост и развитие тутового шелкопряда и его важные экономические характеристики.


3. Исследования протеина теплового шока

Мультивольтинные расы тропической Индии Bombyx mori (Pure Mysore, C. Nichi и Nistari) более устойчивы к высокой температуре по сравнению с экзотическими бивольтинными расами умеренного происхождения. . В отличие от поливольтин, бивольтинные расы обладают лучшим потенциалом урожайности и производят шелк высшего качества, но не выживают в экстремальных климатических условиях, преобладающих в Индии.Известно, что при воздействии высокой температуры клетки проявляют реакцию теплового шока путем синтеза нового набора белков, называемых белками теплового шока (HSP), и интересно отметить, что термотолерантность всегда сопровождается присутствием HSP [46]. . Выдающийся ученый [47] попытался понять разницу в термотолерантности у мультивольтинной (C.Nichi) и бивольтинной (NB18) рас. Также изучалась реакция на тепловой шок у рас тутового шелкопряда с разной термотолерантностью [48–50].Многие количественные характеристики резко ухудшаются при более высоких температурах, и, следовательно, одним из ключевых соображений при разработке бивольтинных гибридов для тропиков может быть потребность в термотолерантных бивольтиновых штаммах. Недавние успехи в селекции тутового шелкопряда и в синтезе протеина, вызванном стрессом, открыли новые возможности для создания надежных продуктивных гибридов тутового шелкопряда [45, 51–57]. При термической обработке все генетические признаки тутового шелкопряда ухудшались с повышением температуры выше стандартного уровня.Рабочие [58] сообщили о подобных результатах, и они обнаружили, что биологические молекулы, такие как ДНК, РНК, липиды и т. Д., Были уязвимы для теплового стресса. Температурный стресс вызывает ряд аномалий на клеточном уровне, поскольку нормальный паттерн синтеза белка останавливается. Однако было обнаружено, что кратковременное воздействие сублетальной высокой температуры на клетки обеспечивает защиту организма от последующих и более серьезных перепадов температуры [59, 60].

Следовательно, очень важно измерить степень фенотипических различий экономических признаков, чтобы понять генетическую устойчивость в различных условиях окружающей среды и продуктивность различных пород в различных условиях окружающей среды.Интенсивное и осторожное приручение на протяжении веков, по-видимому, лишило насекомых возможности приобрести термотолерантность. Среди многих факторов, ответственных за плохую работу бивольтинных штаммов в тропических условиях, главным виновником является температура. Действительно, многие количественные показатели резко снижаются при температуре выше 28 ° C. Исследователи, особенно селекционеры шелкопряда в области шелководства, всегда соглашаются с тем, что разведение таких бивольтинных пород, которые подходят для высоких температур и изменчивых климатических условий Индии, является сложной задачей.

4. Роль влажности в росте тутового шелкопряда

Влажность играет жизненно важную роль в выращивании тутового шелкопряда, и ее роль как прямая, так и косвенная. Комбинированное воздействие температуры и влажности в значительной степени определяет удовлетворительный рост шелкопряда и производство коконов хорошего качества. Он напрямую влияет на физиологические функции тутового шелкопряда. Молодые тутовые черви могут выдерживать более высокие условия влажности, чем черви более позднего возраста, и в таких условиях рост червей идет интенсивно.Оптимальные условия влажности, необходимые для различных червей раннего и позднего возраста, описаны в Таблице 1.

Влажность также косвенно влияет на скорость увядания листьев в грядках для выращивания тутовых шелкопрядов. В засушливых условиях, особенно зимой и летом, листья очень быстро увядают, и потребление личинок снижается. Это влияет на рост личинок и приводит к потере листьев на грядке для выращивания. Задержка роста молодых личинок делает их слабыми и подверженными болезням.При влажности 90 процентов или выше, если температура поддерживается на уровне 26–28 ° C, они могут расти без особого воздействия. Как и температура, влажность также сильно колеблется не только от сезона к сезону, но и в течение самого дня. Следовательно, разводчикам тутового шелкопряда необходимо регулировать его для получения успешного урожая. Для этого используется парафиновая бумага, покрытая воском, для покрытия грядок во время выращивания молодняка, чтобы повысить влажность и избежать высыхания листьев. В противном случае можно использовать влажные подушечки из поролона или бумажные подушечки, смоченные водой, для повышения влажности в грядках для выращивания.Богатые фермеры могут использовать увлажнитель с гигростатом для регулирования влажности в помещении для выращивания. Тем не менее, важно снизить влажность до 70 процентов или ниже во время линьки в каждом возрасте, чтобы обеспечить равномерную и хорошую линьку. Вода составляет значительную часть тканей насекомых, и выживание зависит от способности поддерживать и балансировать воду в организме. Ограничений по влажности нет, и большинство насекомых могут развиваться при любой влажности при условии, что они могут контролировать свой водный баланс [61].Изучено влияние повышенной влажности на массу личинки тутового шелкопряда [62]. Содержание воды в насекомых колеблется от менее 50% до более 90% от общей массы тела, и могут быть большие различия в пределах одного и того же вида даже при выращивании в идентичных условиях [63–65]. Факторы окружающей среды, в частности температура и влажность во время выращивания и влажность листьев тутового дерева, влияют на рост тутового шелкопряда [66, 67]. Роль воды и влажности в шелководстве хорошо изучена рабочими [68].Также были изучены сезонное влияние и роль влажности на рост и пищевую эффективность тутового шелкопряда [69]. Исследователи создали подходящую расу, особенно для весеннего и осеннего выращивания [70]. Роль влажности на параметры производства семян была хорошо изучена разными исследователями [71]. Исследователи [72] также перечислили фенотипические и генотипические признаки в разное время года. Также были изучены характеристики поливольтных гонок в засушливых климатических условиях районов Раяла-Сима в Андхра-Прадеш, Индия [73].Абиотическим фактором, оказывающим существенное влияние на жизнедеятельность насекомых в наземной среде, является влажность. Влажность влияет на доступность свободной воды и содержание воды в пище и в большинстве случаев косвенно влияет на рост и развитие. Требования к влажности варьируются в зависимости от биологического круга. Изучено влияние неблагоприятных климатических условий на успешный урожай бивольтинного кокона [74, 75]. В Италии исследователи изучали влияние различных факторов окружающей среды на рост личинки тутового шелкопряда [76].Сезонные изменения, влажность воздуха и процент влажности почвы оказывают сильное влияние на рост и качество листьев тутового дерева, что, в свою очередь, влияет на здоровье тутового шелкопряда и урожай коконов и, следовательно, указывает на важность влажности листьев как для вкусовых качеств, так и для усвоения растений. питательные компоненты листа.

5. Роль воздуха и света в росте тутового шелкопряда

Как и другим животным, шелкопряды нуждаются в свежем воздухе. При дыхании тутового шелкопряда в станине для выращивания выделяется углекислый газ.Свежесть воздуха можно определить по содержанию в нем CO 2 . Хотя содержание CO 2 в атмосфере обычно составляет 0,03-0,04% в помещении для выращивания, окись углерода, аммиак, диоксид серы и т.д. также выделяются в помещении для выращивания, когда фермеры сжигают древесный уголь для повышения температуры. Эти газы опасны для шелкопряда; поэтому необходимо следить за тем, чтобы свежий воздух проходил через надлежащую вентиляцию, чтобы поддерживать низкий уровень токсичных газов. Если концентрация CO 2 превышает 2%, рост тутового шелкопряда замедляется.Также избегайте использования инсектицидов и дезинфицирующих средств в помещении для выращивания. Молодые личинки тутового шелкопряда более восприимчивы к ядовитым газам, и поэтому искусственная циркуляция воздуха чрезвычайно полезна для удаления загрязненного воздуха. Воздушный поток со скоростью 1,0 м / сек во время выращивания в 5-м возрасте снижает смертность личинок и улучшает пищеварение, перевариваемость, вес личинок, вес кокона и скорость окукливания по сравнению с теми, которые зарегистрированы в условиях нулевой вентиляции [77].

Шелкопряды светочувствительны и имеют тенденцию ползать к тусклому свету.Они не любят ни яркого света, ни полной темноты. Выращивание тутового шелкопряда при постоянном освещении задерживает рост. Кроме того, он вызывает образование пятен и снижает вес личинок и коконов. Шелкопряды любят тусклый свет от 15 до 20 люкс и избегают яркого света и темноты. Поздние черви лучше выживают в периоды 16 часов света и 8 часов темноты. Однако молодые черви предпочитают 16 часов темноты и 8 часов света. Личинки тутового шелкопряда не предпочитают ни сильный свет, ни полную темноту, но обычно светлая фаза, в отличие от темной фазы, активирует личинок.Тутовый шелкопряд — насекомое небольшой продолжительности жизни с положительным фототактизмом [78]; личинки тутового шелкопряда в течение жизненного цикла кормятся в полной темноте, продолжительность их личинки увеличивается, а качество кокона ухудшается [79]. Выращивание в полной темноте или при ярком свете приводит к неравномерности роста и линьки. Светлая фаза обычно увеличивает продолжительность личинки, чем темная фаза. Детально изучено влияние света и температуры на рост тутового шелкопряда [80].

6. Роль факторов окружающей среды в эмбриональном развитии

Влияние температуры на рост и развитие тутового шелкопряда широко изучалось; однако влиянию температуры на эмбриональное развитие уделялось мало внимания.Сообщалось, что у экзотермических организмов, когда скорость развития отображается в зависимости от температуры, получается сигмоидальная кривая с почти линейной корреляцией в диапазоне центральной температуры. Температура — это параметр цикла развития, которым можно управлять экспериментально, но его влияние очень сложно интерпретировать. Физиологическое объяснение гибели эмбрионов после воздействия смертельной температуры, вероятно, будет очень сложным и, вероятно, видоспецифичным. Неправильная инкубация яиц приводит к различным проблемам в период вылупления и выращивания.Если яйцо тутового шелкопряда подвергается инкубации при высокой температуре и низкой влажности, вылупление личинок сильно страдает. Хорошо известно, что условия окружающей среды во время эмбрионального развития влияют не только на характер диапаузы яиц, но и на продолжительность личинок / куколок, вес кокона и яйценоскость [81]. Среди стадии развития тутового шелкопряда, Bombyx mori, стадия яйца имеет самую низкую устойчивость к высокой температуре. Температура во время инкубации также влияет на характер вольтинизма, так как эмбриональная стадия наиболее чувствительна к температуре [82].Бивольтинные яйца, инкубированные при температуре выше 25 ° C, производят бабочек, откладывающих спящие яйца, а яйца, инкубированные при более низкой температуре (ниже 25 ° C), производят бабочек, откладывающих смешанные и полностью негибернирующие яйца. Скорость развития напрямую зависит от температуры и изменяется от влажности. При высокой температуре эмбрион быстрее растет до стадии образования щетинок и погибает, так как желток не может быть использован в соответствии с высокими темпами развития и идет путем нормального развития [83].Киттланс [84] заявил, что температура выше 33 ° C и ненормальная обработка эмбрионов холодом также могут вызывать гибель или аномальное развитие эмбриона. Обработка холодом яиц тутового шелкопряда (Bombyx mori) приводит к образованию тетраплоидных особей, откладывающих крупные яйца [85].

Во время инкубации яиц тутового шелкопряда важно поддерживать влажность в среднем на уровне 80% для нормального роста эмбриона. Если во время инкубации влажность опускается ниже 70%, вывод неизменно низкий.Ряд факторов усложняет влияние влажности на дыхание; наиболее важным из которых является содержание воды в насекомых. Влияние влажности очень тесно связано с температурой, т. Е. С потерей воды из-за высыхания, диффузией дыхательных путей, задержкой проглоченной воды и производством метаболической воды [63]. Влажность менее 60% приводит к потере воды из яиц тутового шелкопряда, а высокая влажность 90% и выше приводит к задержке физиологических сточных вод внутри яйца, что приводит к отравлению эмбрионов.Влияние света на инкубацию и рост эмбриона, потребность в черном боксе на стадии булавочной головки и воздействие света на 10 или 11 день было подробно изучено для бивольтинного тутового шелкопряда [78]. Влажность в сочетании с температурой очень сильно влияет на физиологию яйца [86]. Однако идеальная температура — 25 ° C и относительная влажность 75–80% как для бивольтинных, так и для поливольтинных яиц (Таблица 1). Возникновение неоплодотворенных яиц у тутового шелкопряда и его причина подробно изучены [87].Рабочие также изучили влияние охлаждения мультивольтинных яиц на стадии синего и его влияние на параметры вылупления и выращивания [88].

7. Влияние факторов окружающей среды на показатели питания

Колебания температуры не позволяют насекомым реализовать свой физиологический потенциал, и они достигают этого только в идеальных и благоприятных условиях. Из-за естественного отбора, навязанного менее идеальными условиями окружающей среды, насекомые развили определенные способности оценивать окружающую среду и принимать решения, включающие физиологические, поведенческие и генетические реакции.Эти реакции часто включают изменения в потреблении и использовании пищи, скорости и времени кормления, метаболизме, синтезе ферментов, запасах питательных веществ, поведении в полете и других физиологических и поведенческих процессах. В естественной среде наблюдается большой разброс абиотических компонентов (температура, влажность и т. Д.), Которые играют важную роль в потреблении и использовании пищи. Отклонение факторов окружающей среды от условий, позволяющих насекомым достичь идеальной производительности, может снизить их производительность, если не будет компенсировано изменений в их физиологии и поведении.Переменные температурные режимы могут влиять на производительность иначе, чем постоянная температура; Рост производительности часто стимулируется в условиях колебаний температурного режима [89]. У насекомых также развились различные ферментативные и метаболические приспособления, которые позволяют им выживать и развиваться в широком диапазоне температур. Температурная акклиматизация, физиологическая и поведенческая терморегуляция позволяют отдельным насекомым компенсировать различную степень изменений температуры окружающей среды [90]. Рост тутового шелкопряда проявляется накоплением органических веществ в результате баланса между анаболическими и катаболическими реакциями, подпитываемого питательными веществами, абсорбированными после переваривания пищи.Тутовые шелкопряды из одного и того же генетического фонда по-разному реагировали, когда питались листьями разного питательного качества, что является показателем эффективного использования и превращения пищи в шелковую субстанцию. Когда температура превышает 30 ° C, метаболические функции становятся неустойчивыми, что приводит к ухудшению здоровья. В то же время, когда температура опускается ниже 20 ° C, метаболические функции снова становятся неактивными, что приводит к нерегулярному росту и ухудшению здоровья [91].

Сообщалось об изменении значений потребления и пищеварения у разных пород и одной и той же породы в разное время года [92, 93].Были изучены существенное влияние скорости потребления пищи и качества листьев на рост, вес и выживаемость личинок [94]. Анализ пищевых показателей, таких как скорость поглощения, переваривания, ассимиляции и преобразования у растущих личинок, был бы полезен для понимания расовых различий в пищеварительных и ассимиляционных способностях тутового шелкопряда. Оценка штаммов должна проводиться на основе эффективности использования корма при различных количествах кормления в благоприятных условиях для каждого пола [95].Исследователи [44] сообщили, что с повышением температуры (20–30 ° C) степень превращения шелка в лист уменьшается. На физиологическую активность, прием пищи и экономические параметры влияет температура тела тутового шелкопряда. Сообщалось об увеличении потребления листьев шелковицы в позднем возрасте с понижением температуры выращивания [96]. Изучено влияние различных факторов окружающей среды на потребности насекомых в питании и воде [97–105]. Влияние температуры на превращение листового шелка у тутового шелкопряда показало, что низкая температура (26 ° C) на протяжении всего периода выращивания способствует более высокому превращению шелка с лучшей выживаемостью у бивольтинного шелкопряда [106].Сообщается о высокой эффективности конверсии у личинок, выращенных при низкой температуре [107]. Исследователи проанализировали показатели питания и параметры пищевой эффективности личинок 5-го возраста популярных бивольтинных рас в Индии в различных условиях окружающей среды [108]. Они продемонстрировали, что параметры питательных индексов, такие как прием внутрь, переваривание, приблизительная усвояемость и референсное соотношение, были лучше при оптимальной температуре (23–25 ° C) и влажности (65–70%). Различные авторы [109–111] изучали влияние влажности листьев на параметры питания и развитие шелковой железы тутового шелкопряда.Однако параметры эффективности, такие как кокон ECI, были выше для партий шелкопряда, поддерживаемых при более высоких температурах, и это могло быть связано с меньшим выбором корма, что приводит к некоторым физиологическим приемам для преодоления пищевого стресса (Таблица 4).

8. Влияние температуры на репродуктивный потенциал тутового шелкопряда

Репродуктивная способность тутового шелкопряда зависит от неблагоприятных климатических факторов в дополнение к физиологическому статусу родителя. Коммерческая жизнеспособность тутового шелкопряда зависит от корреляции между коконами, молью и репродуктивным потенциалом штаммов.На вес кокона и репродуктивные особенности большое влияние оказывали различные температурные режимы [112]. Скорость яйценоскости меняется в зависимости от температуры, ускоряясь до точки оптимального температурно-влажностного режима. У шелкопряда Bombyx mori максимальная овуляция и плодовитость с минимальной задержкой наблюдались при температуре 25,36 ± 0,17 ° C, и любое отклонение от этого уровня уменьшало овуляцию, плодовитость кладки и увеличивало удержание яиц [113]. Имеются отчеты о стерильности шелкопряда, вызванной температурой.Самцы тутового шелкопряда почти становились стерильными при хранении при 32 ° C в течение 4 дней после прядения, хотя куколки сохранялись при умеренной температуре 23 ° C в течение всего оставшегося периода [114]. Рабочие [115] сообщили, что самцы тутового шелкопряда становятся стерильными при высокой температуре (выше 33 ° C) во время прядения, и продемонстрировали, что непрерывное воздействие высокой температуры в течение 19 часов вызывает стерильность у самцов тутового шелкопряда [116]. Индукция бесплодия при высокой температуре была изучена у различных индийских рас [117, 118].Качество семенного кокона и яйценоскость напрямую связаны, а количество мертвых куколок варьируется от расы к расе в разные сезоны [119]. Изучено влияние температуры на репродуктивный потенциал болгарских рас [120]. Также изучалось влияние различной температуры и влажности на сохранность кокона семян и куколок новых бивольтинных гибридов (расы CSR) [121]. Роль влажности на сохранение кокона семян и возможность яйценоскости была изучена [122], а исследователи изучили [123] охлаждение кокона и его влияние на параметры зерна и яйценоскость.

9. Забота об окружающей среде во время прядения тутового шелкопряда

Если во время прядения температура поднимается выше 22–25 ° C, скорлупа становится очень рыхлой и складывается с образованием складок и узлов. Он также изменяет свойства серицина. Это вызывает сцепление шелковых волокон и затрудняет наматывание. Низкая температура замедляет выделение шелковой нити, в результате чего образуются коконы большого размера. Кроме того, на прядение уходит очень много времени. Относительная влажность (60–70%) способствует хорошему здоровью, хорошей наматываемости и качественному кокону.Когда он поднимается выше оптимального уровня, личинки и куколки прекращают гибель. Низкая влажность приводит к образованию двухслойных коконов и рыхлых коконов. Во время прядения из фекалий и мочи тутовых шелкопрядов выделяется излишняя влага и вредные газы. Скорость воздушного потока должна быть менее одного метра в секунду, а быстрое или сильное воздушное течение вызывает скопление зрелых шелкопрядов, что приводит к большему количеству двойных коконов. Помещение для монтажа требует умеренного, равномерного освещения, а сильный свет вызывает скопление тутовых шелкопрядов с одной стороны и, в конечном итоге, приводит к образованию двойных коконов или коконов разной толщины.Полная темнота замедлит процесс прядения, что приведет к получению коконов низкого качества. Было изучено влияние температуры и влажности на прядение тутового шелкопряда [124, 125]. В таблице 3 описывается комбинированный эффект влажности и воздушного потока во время прядения тутового шелкопряда, и результаты показывают, что низкая влажность (65%) и воздушный поток 50 см / сек достаточны для получения хорошей надежности выше 95%.

сек. 9 0558 93

Температура Влажность Воздушный поток Повторяемость
( ° C) (%)

20 ° C 65 0 75
50 90
9055 9055 9055 0

25 ° C 65 0 92
50 96
9055 9055 9055 9055

30 ° C 65 0 85
50
90 0 30
50 80

9055 9055
9055 9055 905 )
Дигеста (г) Приблизительная усвояемость (%) Кокон ECI (%) Оболочка ECI (%)

Температура 36 ° C и влажность 40% .04 0,850 27,99 18,27 8,94
Темп. 70% 4,41 1,430 32,44 16,86 9,17

Источник [108].
10.Влияние температуры на параметры посткокона

Параметры качества кокона играют важную роль в качестве намотанного шелка-сырца. Большое количество параметров, некоторые из которых важны для поддержания родительской расы коконов, определяют свойства кокона, а некоторые важны для наматывания кокона. Для намотчика технологические параметры кокона имеют большое значение, так как они определяют качество, количество и эффективность процесса наматывания. Значительные различия в форме коконов и размерах коконов у гибридов приводят к изменению размера филаментов, а также качества намотанной нити [126].Также было упомянуто, что когда наматывание осуществляется с неровными и неоднородными коконами, это приводит к обрыву нити, помехам из-за пробок, плохой наматываемости, плохой варке, пониженному извлечению шелка-сырца, вариациям в денье шелка-сырца и плохой чистоте [127]. Для получения однородного размера нити в автоматических и полуавтоматических намоточных устройствах очень важна однородность размера кокона [128]. Были проведены обширные исследования изменения формы кокона у родительских пород тутового шелкопряда и их гибридов [129–135].Имеется ограниченная информация о совокупном влиянии различной температуры и влажности на различные характеристики коконов и параметры наматывания на разных этапах выращивания и прядения личинок тутового шелкопряда, что, в свою очередь, предоставит ценную информацию разработчикам технологий, которые занимаются улучшением качества и качества. количество шелка, приемлемое на уровне международного стандарта [136]. Изучали различную температуру во время прядения и ее влияние на параметры кокона и наматывания новых бивольтинных гибридов [137].Исследователи оценили влияние различных факторов стресса, связанных с питанием и окружающей средой, на характеристики шелковых волокон бивольтинного тутового шелкопряда [138]. Исследователи также [139] показали, что существует связь между содержанием воды в слоях коконов на стадии прядения и наматываемостью коконов, и рекомендовали, чтобы содержание воды в коконном слое было ниже 20%, чтобы получить коконы хорошего качества с лучшей наматываемостью. . Следует отметить, что при высокой влажности окружающих условий во время прядения кокона вода, присутствующая в прядильном растворе, моче тутового шелкопряда и фекалиях, медленно испаряется, влияя на структуру серицина.Различные исследователи также рассказали, что необходимо соблюдать осторожность после кокона и перед его сбором [140].

11. Стратегии будущего

Индия занимает второе место в мире по производству шелка после Китая. Шелководство в Индии практикуется преимущественно в тропических регионах. Хотя внедрение устойчивых и термотолерантных гонок на поле в летние месяцы оказало значительное влияние на уровень продуктивности и отдачу в некоторых выбранных областях, более поздние планировщики поняли, что это не соответствует таковому у других продуктивных бивольтинных гибридов.Таким образом, уровень признания этого гибрида фермерами не соответствовал ожидаемому уровню из-за низкой урожайности. Это потребовало разработки более подходящего гибрида, устойчивого к температуре, с лучшими характеристиками продуктивности, чем у существующих рас. Программы улучшения шелковицы и тутового шелкопряда — это непрерывный процесс создания новых и высокоурожайных генотипов, которые могут поддерживать продуктивность в условиях биотических и абиотических стрессов. Для получения трансгенного шелкопряда со стабильной экспрессией клонированных генов, имеющих коммерческое значение, необходимо доработать методы генетической трансформации.

Некоторые из более ранних исследований касались отбора пород тутового шелкопряда в отношении термотолерантности путем выявления термотолерантных пород тутового шелкопряда. Однако четкое понимание генетической основы и изменчивости в выражении количественных и качественных генетических признаков во время воздействия высоких температур является важным шагом для выбора потенциальных родительских ресурсов термотолерантности для программ селекции. Для достижения большего успеха необходимо понимание молекулярного механизма термостойкости тутового шелкопряда, идентификация различных групп белков теплового шока (HSP), понимание различных паттернов экспрессии различных HSP у поливолтиновых и биволтиновых рас для определения местонахождения генов. ответственны за индуцируемые нагреванием HSP и последующие шаги по их введению в геном тутового шелкопряда.

Систематический обзор и метаанализ

Систематические обзоры, информирующие о шагах и пробелах в каскаде ТБ

Симптомы со стороны грудной клетки, которые не проходят диагностику ТБ (Пробел 1b).

В систематическом обзоре обращения за медицинской помощью людьми из сообщества с кашлем> 2 недель (т. Е. Симптоматикой грудной клетки) из 1679 рефератов, найденных при поиске литературы за период с 1 января 2000 г. по 1 октября 2015 г., мы выявили 219 подходящих для полнотекстового обзора, из которых 8 содержат релевантные данные для извлечения (рис. A в тексте S2).Во всех восьми исследованиях оценивается доля лиц с симптомами со стороны грудной клетки, которые не обращались к врачу на момент опроса [32,53–59]; семь сообщают, обращались ли пациенты за помощью к государственным или частным поставщикам [32,53–56,58,59]; и три сообщают о доле тех, кто не прошел скрининг на туберкулез с помощью анализа мокроты (таблица C в тексте S2) [32,54,58].

Семь исследований были проведены в 5 из 36 штатов Индии [32,53–56,58,59]. Кроме того, в одном исследовании были собраны данные по домохозяйствам в 30 округах, расположенных во многих штатах [57].Были включены некоторые из беднейших штатов Индии с высокой численностью населения, такие как Уттар-Прадеш и Мадхья-Прадеш. Три исследования были проведены в городских районах, три — в сельской местности и два — как в сельских, так и в городских районах (Таблица C в тексте S2). Все исследования высокого качества с точки зрения стратегии выборки и размера выборки; однако в шести из восьми исследований не сообщалось о доле людей, прошедших скрининг во время сбора популяционных данных (низкое качество по этому критерию), а в шести исследованиях не сообщалось о доле выявленных симптомов со стороны грудной клетки, которые прошли интервью (низкое качество). (Таблица C в тексте S2).

Мета-анализ восьми исследований, оценивающих долю людей в сообществе с кашлем> 2 недель, которые сообщают, что не посещали какого-либо поставщика медицинских услуг после начала кашля, показывают, что в целом 39% (95% ДИ: 30–49 %) грудных симптомов не обращались к врачу (рис. 2). Мета-анализ семи исследований, оценивающих долю лиц с кашлем> 2 недель, которые сообщают, что не посещали поставщика услуг государственного сектора, показывает, что в целом 76% (95% ДИ: 69–82%) грудных симптомов не видели провайдер государственного сектора (рис. 3).Мета-анализ доли лиц с кашлем> 2 недель, которые сообщают, что не посещали частного медицинского учреждения, показывает, что в целом 65% (95% ДИ: 60–70%) грудных симптомов не видели частный сектор. провайдера (рис 4). В трех исследованиях сообщалось о доле пациентов, которым не проводился скрининг с помощью микроскопии мокроты; Эти исследования показали, что 91–97% симптомов со стороны грудной клетки не были исследованы с помощью микроскопии мокроты на момент опроса, даже если они были оценены поставщиком медицинских услуг (таблица C в тексте S2).

Рис. 2. Лесной график исследований, оценивающих долю людей в сообществе с кашлем> 2 недель, которые сообщают, что не посещали какого-либо поставщика медицинских услуг после начала кашля (разрыв 1b).

ES, величина эффекта; ДИ, доверительный интервал.

https://doi.org/10.1371/journal.pmed.1002149.g002

Рис. 3. Лесной график исследований, оценивающих долю людей в сообществе с кашлем> 2 недель, которые сообщают, что не посещали поставщика государственного сектора после начало кашля (Разрыв 1b).

ES, величина эффекта; ДИ, доверительный интервал.

https://doi.org/10.1371/journal.pmed.1002149.g003

Рис. 4. Лесной график исследований, оценивающих долю людей в сообществе с кашлем> 2 недель, которые сообщают, что не посещали поставщика частного сектора после начало кашля (Разрыв 1b).

ES, величина эффекта; ДИ, доверительный интервал.

https://doi.org/10.1371/journal.pmed.1002149.g004

пациент с туберкулезом, прошедший обследование в диагностических учреждениях, не получил успешного диагноза (пробел 2).

В систематическом обзоре исследований пациентов с ТБ, оцениваемых в диагностических учреждениях, которым не был поставлен диагноз ТБ, из 1704 рефератов, найденных путем поиска литературы за период с 1 января 2000 г. по 26 февраля 2015 г., мы определили 26 подходящих для полнотекстовый обзор (рис. C в тексте S3). Из них шесть исследований содержат соответствующие данные о доле симптомов со стороны грудной клетки, у которых не удалось получить второй образец мокроты [23,38,60–63]. Три исследования содержат данные о доле пациентов, проходящих обследование на ТБ с отрицательным мазком мокроты, которым не удалось пройти рентген грудной клетки, который является заключительным этапом диагностического обследования [38–40].

Шесть исследований, описывающих долю пациентов, которым не удалось сдать второй образец мокроты, были проведены в 7 из 36 штатов Индии, причем два исследования были сосредоточены исключительно на городском населении, два исследования были посвящены исключительно сельскому населению, а два исследования были сосредоточены на обоих. (Таблица F в тексте S3). Три исследования, описывающие долю пациентов, завершивших диагностическое обследование на ТБ с отрицательным мазком мокроты, были проведены в трех разных штатах: одно исследование проводилось исключительно в сельской местности, а два исследования проводились как в городских, так и в сельских районах (таблица G в тексте S3. ).

Что касается исследований, оценивающих долю пациентов, которые не смогли сдать два образца мокроты, одно исследование было среднего качества, потому что оно проводилось только в одном центре микроскопии в городской больнице третичного уровня; по другим показателям исследования были высокого качества (таблица F в тексте S3). Одно из исследований, в которых оценивалась потеря для последующего наблюдения во время диагностического обследования с отрицательным мазком мокроты, было исключено из-за небольшого размера выборки <150 пациентов (таблица G в тексте S3) [38].

Метаанализ шести исследований, оценивающих долю пациентов, которые не смогли предоставить второй образец мокроты, показывает, что в целом 11% (95% ДИ: 7–15%) симптоматики грудной клетки не могут предоставить второй образец мокроты. (Рис 5).Поскольку было проведено менее пяти исследований, в которых оценивалась доля пациентов, которые не прошли обследование на ТБ с отрицательным мазком мокроты, мы не проводили формального метаанализа; однако эти исследования показывают, что большая часть (61–80%) лиц с подозрением на ТБ не может пройти многоэтапную диагностику ТБ с отрицательным результатом мазка мокроты (таблица G в тексте S3) [38–40].

Рис. 5. Лесной график исследований, оценивающих долю пациентов, которые не смогли сдать второй мазок мокроты (т. Е. «Диагностический дефолт»), который позволяет оценить долю больных ТБ с положительным мазком, которые могут быть «пропущены» в ТБ. диагностические средства (Пробел 2).

ES, величина эффекта; ДИ, доверительный интервал.

https://doi.org/10.1371/journal.pmed.1002149.g005

Прекращение лечения до последующего наблюдения за пациентами с положительным мазком (пробел 3).

В систематическом обзоре исследований пациентов с туберкулезом, которым был поставлен соответствующий диагноз, но которые не прошли регистрацию на курс лечения (т. Е. Потеря до лечения для последующего наблюдения), из 1704 рефератов, найденных при поиске литературы за период с 1 января 2000 г. 26 февраля 2015 г. мы определили 26 исследований, подходящих для полнотекстового обзора (рис. C в тексте S3).Из них 14 содержат соответствующие данные о потерях до лечения для последующего наблюдения за больными ТБ с положительным мазком [44–46,60,62–71], а два исследования содержат данные о потерях до лечения для последующего наблюдения за пациентами с МЛУ ТБ [47 , 48].

Исследования потери пациентов до лечения и последующего наблюдения за пациентами с положительным мазком были проведены в 10 различных штатах Индии. Четыре из этих исследований были проведены исключительно в сельской местности; четыре были проведены исключительно в городских районах; и шесть были проведены в обоих (таблица H в тексте S3). Исследования потери пациентов с МЛУ-ТБ до лечения и последующего наблюдения проводились как в городских, так и в сельских условиях в двух разных штатах (таблица H в тексте S3).

Из всех 16 предварительных исследований, потерянных для последующих исследований, четыре относятся к среднему качеству для отбора образцов, поскольку они собирали данные из отдельных микроскопических центров, что потенциально ограничивает их репрезентативность на местном уровне (таблица H в тексте S3). Кроме того, некоторые исследования были низкого качества с точки зрения методологии исследования (пять исследований) и временных рамок оценки (11 исследований) (таблица H в тексте S3).

Метаанализ 14 исследований пациентов с положительным мазком мокроты показывает, что общий процент потерь до лечения до последующего наблюдения составил 16% (95% ДИ: 12–20%) (рис. 6).Три из этих исследований предоставляют конкретную информацию о доле пациентов, потерявших до лечения, по сравнению с пациентами, которые были потеряны во время направления к врачу. В этих исследованиях сообщается, что 98/120 (81,6%) [44], 62/63 (98,4%) [45] и 75/145 (51,7%) [46] случаев потери до лечения для последующего наблюдения среди пациентов с положительным мазком мокроты имели место. во время направления к специалисту для совокупной распространенности 235/328 (71,6%, 95% ДИ: 66,5–76,3%). Объединенная распространенность двух исследований пациентов с МЛУ-ТБ показывает, что показатель потери до лечения и последующего наблюдения составил 23.0% (95% ДИ: 21,8–24,3%) (таблица H в тексте S3).

Рецидив и смерть от ТБ после лечения (разрыв 5).

В систематическом обзоре исследований, посвященных оценке рецидивов и смерти от ТБ после лечения, из 2547 коротких отрывков, найденных в результате поиска литературы за период с 1 января 2000 г. по 9 октября 2015 г., мы выявили 30 исследований, подходящих для проведения полной проверки. текстовый обзор (рис. D в тексте S4). Из них 10 содержат данные о рецидивах или смерти от ТБ после лечения в RNTCP. В трех исследованиях оценивали преимущественно ВИЧ-отрицательных пациентов с туберкулезом легких с положительным мазком мокроты, завершивших терапию категории I; трое обследованных ВИЧ-инфицированных больных туберкулезом легких с положительным мазком мокроты, завершивших терапию категории I; в четырех исследованиях оценивалась смешанная популяция пациентов с легочным туберкулезом с отрицательным мазком, легочного туберкулеза с положительным мазком и внелегочным туберкулезом, завершивших терапию категории I или III; и в одном исследовании оценивали повторное лечение больных ТБ с положительным мазком мокроты, завершивших терапию категории II (Таблица K в тексте S4).

Исследования проводились в пяти штатах Индии. Восемь исследований были проведены в городских районах и два — в сельской местности (таблица K в тексте S4). Все исследования высокого качества с точки зрения стратегии выборки; однако в двух исследованиях не сообщалось о доле когорты, которая была потеряна для последующего наблюдения в течение периода исследования [72,73]. Качество двух исследований, описывающих исходы ТБ среди ВИЧ-инфицированных, очень низкое, поскольку размер выборки составляет <100 пациентов (таблица K в тексте S4) [51,74].

Мы не проводили формальный мета-анализ результатов этих исследований, поскольку ни в одной из этих групп не было пяти или более подходящих исследований; однако мы оценили объединенную распространенность рецидивов и смертей для этих различных типов ТБ на основе ограниченных доступных данных. Мы исключили исследования, в которых не было полных данных по случаям смерти и рецидива туберкулеза, а также по случаям смерти и рецидивам туберкулеза, а также исследования, в которых наблюдалось не менее 12 и не более 24 месяцев.

Для новых пациентов с положительным мазком мокроты мы нашли два исследования и оценили совокупную распространенность в 16.2% (95% ДИ: 14,25–18,5%) для комбинированного исхода рецидива ТБ и смерти [14,25]. Для новых пациентов с отрицательным мазком, внелегочным и повторным лечением пациентов с отрицательным мазком мазка мы нашли четыре исследования и оценили объединенную распространенность 8,8% (95% ДИ: 6,9–11,1%) для комбинированного исхода рецидива ТБ и смерти [49– 52]. Для пациентов, прошедших повторное лечение с положительным мазком мокроты, мы оцениваем комбинированный исход рецидива ТБ и смерти после лечения в одном исследовании на 27,3% (95% ДИ: 19,1–37,4%) [25]. Примечательно, что у ВИЧ-инфицированных пациентов с ТБ всех типов частота рецидивов и смертей от ТБ после лечения более вариабельна и часто значительно выше (от 9% до 61%) по сравнению с общей популяцией ТБ [51,52,74,75] .Это говорит о том, что пациенты с коинфекцией ВИЧ могут составлять более высокую долю пациентов, проходящих повторное лечение, и плохие результаты в RNTCP, чем можно было бы предположить, исходя из их 6% -ной распространенности в общей популяции ТБ.

Каскад лечения туберкулеза на 2013 год

В таблице 4 и на рис. 7 представлен каскад лечения туберкулеза в рамках государственной программы борьбы с туберкулезом в Индии на 2013 г. –1 083 243), или 38.9% были успешно пролечены в рамках RNTCP и достигли как минимум 1 года безрецидивной выживаемости. Мы разделяем наше обсуждение оценок для каждого шага и пробела на следующие разделы: доступ к медицинской помощи, диагностика и регистрация в лечении, сохранение в течение курса лечения и безрецидивная выживаемость.

Получение помощи.

Из 2 700 000 широко распространенных активных пациентов с ТБ (Шаг 1), по нашим оценкам, 1 938 027 (95% ДИ: 1 840 748–2050 001), или 71,8%, больных ТБ были охвачены и обследованы в государственных диагностических учреждениях ТБ (Шаг 2), исходя из при обратном расчете для каждой формы ТБ на основе оценок для Пробела 2 и Шага 3 (текст S5).Это говорит о том, что около 761 973 (95% ДИ: -250 001–1 959 252), или 28,2%, больных туберкулезом не имели доступа к государственным противотуберкулезным учреждениям, никогда не обращались за противотуберкулезной помощью или напрямую обращались за помощью в частном секторе (Gap 1a / 1б).

Нет данных, которые позволили бы получить более подробное представление об оценках Разрыва 1a. Для Gap 1b, как описано выше, метаанализ исследований, оценивающих обращение за медицинской помощью, показал, что 39% (95% ДИ: 30–49%) людей с кашлем> 2 недель не обращались к врачу на момент обращения за помощью. опрос; 76% (95% ДИ: 69–82%) не видели поставщика услуг государственного сектора; и 91–97% из них не прошли обследование на ТБ с анализом мокроты (рис. 2–4).

Диагностика и постановка на лечение.

Мы оценили Пробел 2 — долю больных туберкулезом, у которых не диагностирован диагноз, несмотря на то, что они проходят обследование в государственных диагностических учреждениях, — отдельно для каждой формы туберкулеза. По нашим оценкам, для новых пациентов с положительным и повторным мазком мокроты 11% (95% ДИ: 7–15%) людей с подозрением на туберкулез, обратившихся в государственные центры микроскопии, теряют возможность последующего наблюдения до сдачи второй мокроты. образец, основанный на метаанализе шести описанных выше исследований (рис. 5).Используя оценку дополнительного сбора второго образца мокроты для диагностики ТБ с положительным мазком [37], мы затем оцениваем, что 1,3% (95% ДИ: 0,08–1,8%) всех пациентов с положительным мазком, или 9 491 (95 % ДИ: 5,811–13,209) и 2,734 (95% ДИ: 1,674–3,805) новых пациентов с положительным мазком и повторным лечением, соответственно, остались недиагностированными, несмотря на обращение в государственные диагностические учреждения (текст S5).

Для новых пациентов с отрицательным мазком мокроты, используя соотношение 1,42: 1 (95% ДИ: 1,26: 1 до 1,59: 1) новых пациентов с ТБ с положительным мазком и новых пациентов с отрицательным мазком, обращающихся за помощью в государственный сектор, мы оцениваем, что 514 161 (95% ДИ: 456 873–582 402) новые пациенты с туберкулезом с отрицательным мазком мокроты обратились за помощью в государственные диагностические учреждения (этап 2) (текст S5).Поскольку 320 982 (95% ДИ: 318 491–323 148) новых больных ТБ с отрицательным мазком мокроты были успешно диагностированы (этап 3), по нашим оценкам, 193 179 (95% ДИ: 133 725–263 911), или 37,6%, пациентов с новым отрицательным мазком мокроты. Туберкулез оставался недиагностированным, несмотря на обследование в государственных учреждениях (Пробел 2). Эта оценка согласуется с результатами нашего систематического обзора, в котором были выявлены три исследования, показывающие, что (61–80%) подозреваемые в ТБ не могут завершить многоэтапное диагностическое обследование ТБ с отрицательным мазком мокроты, что, вероятно, приводит к значительному занижению диагноза (Таблица G в тексте S3) [38–40].

Для повторного лечения пациентов с отрицательным мазком мы также использовали соотношение 1,42: 1 (95% ДИ: от 1,26: 1 до 1,59: 1) пациентов с повторным лечением с положительным мазком к пациентам с повторным лечением с отрицательным мазком для оценки Разрыва 2 (текст S5). Из 148 104 (95% ДИ: 131 602–167 760) пациентов, прошедших повторное лечение с отрицательным мазком мокроты и прошедших оценку в государственных диагностических учреждениях (этап 2), по нашим оценкам, 105 893 (95% ДИ: 105 071–106 607), или 71,5%, были успешно диагностированы (этап 3). ) и 42 211 (95% ДИ: 24 995–62 689), или 28,5%, остались недиагностированными (разрыв 2).

В отношении пациентов с внелегочным ТБ мы предполагаем, что 19,5% (95% ДИ: 15,1–23,6%) пациентов, обследованных в диагностических учреждениях ТБ, остаются недиагностированными (разрыв 2). Это говорит о том, что около 310 284 (95% ДИ: 291 920–329 142) пациентов с внелегочным ТБ были обследованы в диагностических учреждениях ТБ (этап 2), из которых 249 779 (95% ДИ: 247 840–251 465) были успешно диагностированы (этап 3) и 60 505 ( 95% ДИ: 40 455–81 302) остались недиагностированными (Пробел 2) (Текст S5).

Для пациентов с МЛУ ТБ мы используем оценку ВОЗ в 61 000 (95% ДИ: 47 000–76 000) пациентов с МЛУ ТБ среди всех зарегистрированных больных ТБ в RNTCP в качестве количества пациентов с МЛУ ТБ, прошедших обследование в государственных диагностических учреждениях ТБ (Шаг 2).По нашим оценкам, 25 062 (95% ДИ: 24 678–25 493), или 41,1%, из этих пациентов были успешно диагностированы с МЛУ ТБ (этап 3), что позволяет предположить, что 35 938 (95% ДИ: 21 507–51 322), или 58,9%, остались. недиагностированный или ошибочно диагностированный с другими формами ТБ (Пробел 2).

Обобщая эти результаты, мы оцениваем, что из 1 938 027 (95% ДИ: 1 840 748–2050 001) пациентов со всеми формами ТБ, которые обратились для оценки в государственные диагностические учреждения ТБ (этап 2), 1 629 906 (95% ДИ: 1 624 270–1634 903) , или 84.1% были правильно диагностированы (этап 3), а 308 121 (95% ДИ: 205 845–425 731), или 15,9%, остались недиагностированными (разрыв 2).

Мы также подготовили отдельные оценки для каждой формы ТБ для Разрыва 3 — доли пациентов с диагнозом ТБ, которые не зарегистрированы для лечения в государственной программе по борьбе с ТБ (т. Е. Предварительное лечение потеряно для последующего наблюдения).

Для Разрыва 3 среди больных ТБ с положительным мазком мокроты, как отмечалось выше, метаанализ результатов 14 исследований показывает, что процент потери до лечения до последующего наблюдения составляет 16% (95% ДИ: 12–20%) (рис. и Таблица H в тексте S3).Этот результат согласуется с нашей оценкой Gap 3 с использованием данных из отчетов TB India (S5 Text) [16,20]. В этом анализе в 2013 г. было диагностировано 928 190 новых и повторно пролеченных больных туберкулезом с положительным мазком мокроты (этап 3), а 792 935 (85,4%) новых пациентов и пациентов с повторным лечением с положительным мазком были зарегистрированы на лечении (этап 4), что позволяет предположить, что их было 135 255 (14,6%). ) потеря до лечения для последующих пациентов (разрыв 3). Поскольку эта оценка находится в пределах доверительного интервала оценки метаанализа, мы используем более консервативную оценку Gap 3 из отчетов TB India в каскаде TB.

Для Разрыва 3 среди новых больных ТБ с отрицательным мазком мокроты, используя 10,5% (95% ДИ: 9,8–11,1%) коэффициент потери до лечения для последующего наблюдения, мы оцениваем, что было диагностировано 320 982 новых пациента ТБ с отрицательным мазком мокроты (Шаг 3). Поскольку 287 279 новых пациентов с отрицательным мазком мокроты были зарегистрированы в лечении (этап 4), по нашим оценкам, 33 703 (95% ДИ: 31 212–35 869) были диагностированы, но не были зарегистрированы для лечения (Пробел 3) (Текст S5). Используя ту же частоту потери пациентов до лечения и последующего наблюдения за пациентами с внелегочным туберкулезом, мы оцениваем, что у 249 779 пациентов был диагностирован диагноз (этап 3).Поскольку 223 552 пациента с внелегочным туберкулезом были зарегистрированы на лечении (этап 4), по нашим оценкам, 26 227 (95% ДИ: 24 288–27 913) были диагностированы, но не были зарегистрированы для лечения (Пробел 3) (Текст S5). Используя тот же показатель потери пациентов до лечения и последующего наблюдения за пациентами с отрицательным мазком мазка после повторного лечения, мы оцениваем, что диагноз был поставлен 105 893 пациентам (этап 3). Поскольку 94 774 пациента с отрицательным результатом мазка мазка были зарегистрированы в лечении (этап 4), по нашим оценкам, 11 119 (95% ДИ: 10 297–11 833) были диагностированы, но не были зарегистрированы для лечения (Пробел 3) (Текст S5).

Для пациентов с МЛУ-ТБ, используя оценку Gap 3 в 23,0% (95% ДИ: 21,8–24,3%) из метаанализа, мы оцениваем, что 25 062 (95% ДИ: 24 678–25 493) больных МЛУ ТБ были диагностированы в 2013 г. (этап 3), из которых 19 298 (77,0%) прошли курс лечения (этап 4).

Суммируя эти оценки, мы оцениваем, что в 2013 г. было диагностировано 1 629 906 (95% ДИ: 1 624 270–1634 903) пациентов со всеми формами ТБ (Шаг 3), но только 1 417 838 (87,0%) пациентов в конечном итоге были зарегистрированы для лечения (Шаг 4) , что предполагает, что 212068 (95% ДИ: 206 432–217 065), или 13.0% всех больных туберкулезом в Индии были диагностированы в государственных диагностических учреждениях, но были потеряны для последующего наблюдения до начала лечения (разрыв 3).

Задержка на курс лечения.

Число новых больных ТБ с положительным и отрицательным мазком, внелегочных и МЛУ-ТБ, завершивших лечение, было извлечено из отчетов TB India и оценок для Этапа 4, Пробела 4 и Этапа 5 для этих форм. ТБ представлены в таблице 4 [20]. Для пациентов с отрицательным мазком мазка повторного лечения в одном исследовании описывается 83.2% (95% ДИ: 81,0–85,2%) процент завершения лечения в этой популяции пациентов [22]. Таким образом, по нашим оценкам, из 94 774 пациентов с отрицательным мазком мокроты, прошедших повторное лечение и начавших лечение ТБ (этап 4), 78 852 (95% ДИ: 76 767–80 747) достигли завершения лечения (этап 5) и 15 922 (95% ДИ: 14 027–18 007) оказались неудачными. лечения, были потеряны для последующего наблюдения или умерли во время курса лечения (Пробел 4).

Суммируя эти оценки, мы оцениваем, что из 1 417 838 пациентов со всеми формами ТБ, зарегистрированных для лечения в RNTCP в 2013 г. (этап 4), 1 211 764 (95% ДИ: 1 219 679–1 223 659), или 86.2%, успешно завершили лечение (этап 5). Это говорит о том, что 196 074 (95% ДИ: 194 179–198 159), или 13,8%, из этих пациентов, не получивших лечения, были потеряны для последующего наблюдения или умерли во время курса лечения (разрыв 4).

Безрецидивная выживаемость.

Для новых пациентов с положительным мазком мокроты, используя оценку Gap 5 в 16,2% (95% ДИ: 14,2–18,5%) из метаанализа, мы оцениваем, что из 541 736 пациентов, завершивших лечение (этап 5), 453 975 (95% ДИ: 441 515–464 809) достигли 1-летней выживаемости без рецидива (этап 6) и 87 761 (95% ДИ: 76 927–100 221) испытали рецидив или смерть от ТБ в течение 12–24 мес после завершения лечения (разрыв 5).

Для новых пациентов с отрицательным мазком мокроты, используя оценку Gap 5 в 8,8% (95% ДИ: 6,9–11,1%) из метаанализа, мы оцениваем, что из 258 551 пациента, завершивших лечение (этап 5), 235 799 ( 95% ДИ: 229 852–240 711) достигли 1-летней выживаемости без рецидива (этап 6), а 22 752 человека (95% ДИ: 17 840–28 699) испытали рецидив или смерть ТБ после лечения (разрыв 5). Используя ту же оценку 8,8% -ного разрыва 5 для пациентов с внелегочным туберкулезом, мы оцениваем, что из 207 903 пациентов, завершивших лечение (этап 5), 189 608 (95% ДИ: 184 826–193 558) достигли 1-летней безрецидивной выживаемости (этап 6) и 18 295 человек (95% ДИ: 14 345–23 077) испытали рецидив или смерть после лечения ТБ (разрыв 5).Используя ту же оценку 8,8% Gap 5 для повторного лечения пациентов с отрицательным мазком мокроты, мы оцениваем, что из 78 852 пациентов, завершивших лечение (этап 5), 71 913 (95% ДИ: 68 246–75 175) достигли 1-летней выживаемости без рецидива (этап 6) и 6 939 человек (95% ДИ: 1 592–12 501) испытали рецидив или смерть после лечения ТБ (разрыв 5).

Для пациентов с повторным лечением с положительным мазком мазка, используя оценку Gap 5 в 27,3% (95% ДИ: 19,1–37,4%) из систематического обзора [25], мы оцениваем, что из 125 901 пациента, завершивших лечение (этап 5), 91 530 (95% ДИ: 78 814–101 854) достигли 1-летней выживаемости без рецидива (этап 6) и 34 371 (95% ДИ: 24 047–47 087) испытали рецидив или смерть после лечения ТБ (разрыв 5).Используя ту же оценку разрыва 5 в 27,3% для пациентов с МЛУ-ТБ, мы оцениваем, что из 8 821 пациента, завершивших лечение (этап 5), 6413 (95% ДИ: 5 522–7 136) достигли 1-летней безрецидивной выживаемости (этап 6). и 2408 человек (95% ДИ: 1,685–3299) испытали рецидив или смерть после лечения ТБ (разрыв 5).

Суммируя эти оценки, мы оцениваем, что из 1221 764 пациентов, успешно завершивших лечение в RNTCP в 2013 г. (этап 5), 1049 237 (95% ДИ: 1 008 775–1 083 243), или 85,9%, достигли оптимального исхода 1-летнего ТБ. безрецидивная выживаемость (этап 6) и 172 527 (95% ДИ: 136 436–214 884), или 14.1% испытывают рецидив ТБ или смерть в течение 12–24 месяцев после завершения противотуберкулезной терапии (разрыв 5).

Каскад лечения туберкулеза в определенных подгруппах населения

Мы представляем каскад лечения туберкулеза на 2013 год для конкретных групп больных туберкулезом. Эти каскады исключают Шаг 1 (количество распространенных пациентов), поскольку дезагрегированные оценки распространенности недоступны для большинства форм ТБ. Поскольку они начинаются с шага 2 (количество пациентов, оцениваемых в диагностических учреждениях), эти каскады субпопуляций отражают эффективность служб RNTCP в выявлении, привязке к уходу, лечению и удержанию пациентов с ТБ.

На рис. 8 представлен каскад новых больных ТБ с положительным мазком мокроты. По нашим оценкам, из 730 108 (95% ДИ: 726 428–733 826) пациентов, обследованных в государственных диагностических учреждениях, 453 975 (95% ДИ: 441 515–464 809), или 62,2%, достигли безрецидивной выживаемости. Умеренный отсев пациентов произошел в промежутке 3 (диагностировано, но не начато лечение), промежутке 4 (потеря для последующего наблюдения, неудача или смерть во время лечения) и промежутке 5 (рецидив или смерть после лечения туберкулезом).

Рис 8.Каскад лечения туберкулеза для новых больных туберкулезом с положительным мазком мокроты, выявленных и пролеченных в рамках пересмотренной национальной программы борьбы с туберкулезом (RNTCP) в Индии, 2013 г.

Столбики ошибок показывают 95% доверительный интервал.

https://doi.org/10.1371/journal.pmed.1002149.g008

На рис. 9 представлен каскад новых пациентов с туберкулезом с отрицательным мазком мокроты. По нашим оценкам, из 514 161 (95% ДИ: 456 873–582 402) пациента, обследованных в государственных диагностических учреждениях, это 235 799 (95% ДИ: 229 852–240 711), или 45.9% достигли безрецидивной выживаемости 1 год. Наиболее значительный отток произошел в Разрыве 2 (оценивается в диагностических учреждениях, но не диагностирован туберкулез).

Рис. 9. Каскад лечения туберкулеза для новых больных туберкулезом с отрицательным мазком мокроты, выявленных и пролеченных в рамках пересмотренной национальной программы борьбы с туберкулезом (RNTCP) в Индии, 2013 г.

Столбики ошибок отображают 95% доверительный интервал.

https://doi.org/10.1371/journal.pmed.1002149.g009

На рис. 10 представлен каскад повторного лечения больных ТБ с положительным мазком мокроты.По нашим оценкам, из 210 307 (95% ДИ: 209 247–211 378) пациентов, обследованных в государственных диагностических учреждениях, 91 530 (95% ДИ: 78 814–101 854), или 43,5%, достигли безрецидивной выживаемости. Наиболее значительный отток наблюдался в промежутке 4 (потеря для последующего наблюдения, неудача или смерть во время лечения) и промежутке 5 (рецидив или смерть после лечения туберкулезом).

Рис. 10. Каскад лечения туберкулеза для повторного лечения больных туберкулезом с положительным мазком, выявленных и пролеченных в рамках пересмотренной национальной программы по борьбе с туберкулезом (RNTCP) в Индии, 2013 г.

Планки погрешностей отображают 95% доверительный интервал.

https://doi.org/10.1371/journal.pmed.1002149.g010

На рис. 11 представлен каскад для пациентов с МЛУ-ТБ. По нашим оценкам, из 61 000 (95% ДИ: 47 000–76 000) пациентов с МЛУ ТБ, которые обратились в государственные диагностические учреждения ТБ, только 8 821 (14,4%) были должным образом диагностированы и прошли курс лечения МЛУ ТБ и 6 413 (95% ДИ: 5 522-7 136) ), или 10,5%, в конечном итоге достигли 1-летней безрецидивной выживаемости. Несмотря на то, что на каждом этапе каскада наблюдается значительный отток, Пробел 2 (оценивается в диагностических учреждениях, но не диагностирован туберкулезом с множественной лекарственной устойчивостью) вносит наибольший вклад в низкую эффективность каскада.

Рис. 11. Каскад лечения туберкулеза для пациентов с туберкулезом с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ-ТБ), выявленных и пролеченных в рамках пересмотренной национальной программы по борьбе с туберкулезом (RNTCP) в Индии, 2013 г.

Столбики ошибок отображают 95% доверительный интервал для каждой оценки.

https://doi.org/10.1371/journal.pmed.1002149.g011

Антитела | Бесплатный полнотекстовый | Идентификация человеческих моноклональных антител против SARS-CoV-2 у выздоравливающих пациентов с использованием иммортализации EBV

1.Введение

Пандемия COVID-19, впервые обнаруженная в Ухане в конце 2019 года, достигла Европы, а также других стран Азии и Америки к январю 2020 года. Впоследствии появились многие мутанты с большей инфекционностью по сравнению с исходным штаммом. Резкое распространение болезни привело к быстрой мобилизации многих лабораторий и клинических подразделений для поиска методов лечения, включая поиск нейтрализующих моноклональных антител (mAb). Их можно выделить несколькими различными методами, и они показали свою эффективность при многих других инфекционных заболеваниях [1,2,3,4].Методы включают выделение из библиотек человеческих VH-VL, прямое секвенирование антител из памяти или антиген-специфичных В-клеток, очищенных от людей после инфицирования или поствакцинации, размножение in vitro клонов В-клеток, а также получение более классических mAb из иммунизированных животных с последующей гуманизацией [1,5]. Применение этих методов позволило идентифицировать множество нейтрализующих mAb против SARS-Cov-2, некоторые из которых были доставлены в клинику (обзор см. В работах [6,7]).Наш регион оказался первым и одним из наиболее пострадавших среди европейских стран. Бергамо, в частности, стал, к сожалению, всемирно известен своей трудностью справиться с резко возросшим уровнем смертности, который, по оценкам, составляет около 15 смертей в день на 100000 жителей на местном уровне во время пика эпидемии, что приводит к смерти до 0,15%. популяции в эпицентре во время первой волны [8], проблема позже возникла и в других местах. Пандемия быстро привела к переводу в отделения COVID-19 большинства отделений главной городской больницы на 800 коек.В течение марта 2020 года до 70–80% коек во всей больнице были заняты пациентами с COVID-19 [9,10]. В отделении интенсивной терапии (ОИТ) количество коек увеличилось с 46 до 100, 88 из которых были предназначены для пациентов с COVID-19 [9,10]. Многие врачи, медсестры и другой персонал также скончались от инфекции в первые месяцы пандемии [9]. Несмотря на эти крайние трудности, основные виды деятельности для очень больных и неотложных пациентов, таких как онкологические пациенты, поддерживались с большими усилиями и самоотверженностью всего задействованного персонала [9,10].В нашей лаборатории во время первого очень строгого режима изоляции, который длился 8 недель с 8 марта по 4 мая 2020 года, были разрешены только жизненно важные клинические лабораторные работы ограниченным числом сотрудников, а все остальные работники всегда были строго ограничены дома. , за исключением покупки еды или проблем со здоровьем.

В этом контексте, поскольку наше подразделение ранее имело опыт в культивировании В-клеток, их иммортализации вирусом Эпштейна-Барра (ВЭБ) и терапевтическими моноклональными антителами (мАт), а также наличие некоторых из первых тестов для обнаружения антител к SARS-CoV-2, мы решили попытаться изолировать новые mAb от местного персонала, выздоровевшего от COVID-19, как только будет снята полная изоляция, что позволит возобновить несущественные действия.Мы использовали простую технику иммортализации EBV, начиная с периферической крови выздоравливающих пациентов с COVID-19. Этот метод позволил относительно быстро выделить два клона В-клеток, экспрессирующих антитела IgG1 против белка SARS-Cov-2 Spike в достаточном количестве для очистки и функциональных анализов без использования методов генной инженерии. Продукция MAb отобранными клонами B-клеток была довольно стабильной с течением времени. Наши результаты обсуждаются в контексте выделения mAb для COVID-19 и других инфекционных заболеваний.

2. Материалы и методы

2.1. Доноры, очистка клеток и заражение EBV
Линия клеток мартышки B95-8, продуцирующая EBV, была описана ранее [11] и была размножена в среде RPMI1640 с добавлением глутамина (Euroclone, Pero, Италия), гентамицина (Fisiopharma, Palomonte, Италия). ) и 10% фетальной телячьей сыворотки (FBS) (Евроклон). Его выращивали до слияния, супернатант собирали через 3-5 дней после слияния и использовали в свежем виде после фильтрации 0,8 мкМ (Millipore, Корк, Ирландия).

Исследование было одобрено этическим комитетом больниц в соответствии с Хельсинкской декларацией 1975 года. Цельная кровь была собрана в вакуумированные контейнеры с ЭДТА (BD Biosciences, Сан-Хосе, Калифорния, США) после получения информированного согласия.

Мононуклеарные клетки (PBMC) выделяли из периферической крови стандартным центрифугированием в градиенте Ficoll Hypaque (Cedarlane, Burlington, ON, Canada). Переключаемые В-клетки памяти дополнительно очищали магнитной селекцией с использованием набора для выделения В-клеток памяти (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Германия) в соответствии с инструкциями производителя.

В-клетки памяти ресуспендировали в 1 мл полной усовершенствованной среды RPMI (Gibco, Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс), содержащей 2,5 мкг / мл ODN2006 CpG (Invivogen, Тулуза, Франция). Добавляли в общей сложности 1 мл отфильтрованного супернатанта B95-8 и клетки инкубировали в течение 5 ч при 37 ° C, 5% CO 2 . Затем клетки разбавляли до 50 или 250 В-клеток / мл в полной среде, содержащей 1% супернатанта культуры B95.8, 2 × 10 5 / мл аутологичных облученных PBMC, 2,5 мкг / мл ODN2006 CpG, 50 МЕ rhIL2 (Пролекин , Novartis Pharma Gmbh, Нюрнберг, Германия) и 500 нг / мл циклоспорина A (Novartis Pharma Stein AG, Stein, Швейцария), и 200 мкл раствора распределяли в 96-луночные планшеты с плоским дном.Половину объема каждой лунки заменяли один раз в неделю свежей средой, содержащей ODN2006 CpG, rhIL-2 и циклоспорин A, до тех пор, пока клоны не могли быть размножены, после чего к культурам добавляли только rhIL-2. Некоторые инфицированные клетки помещали в 6-луночные планшеты для создания пула EBV-LCL.

2.2. Тесты на антитела к SARS-CoV-2

Спайковые антитела против SARS-Cov-2 были количественно определены в сыворотке доноров и супернатантах культур с использованием набора LIAISON ® SARS-CoV-2 S1 / S2 IgG на LIAISON ® XL платформы (DiaSorin S.p.A, Saluggia, Италия) в соответствии с инструкциями производителя. Некоторые супернатанты также тестировали с помощью набора Elecsys ® Anti-SARS-Cov-2 Nucleocapsid Protein Kit (Roche Diagnostics, Базель, Швейцария).

2.3. Характеристика и секвенирование IgG

Изотип иммуноглобулина анализировали путем окрашивания клеток меченными FITC анти-IgG, IgA и каппа, а также PE-меченными лямбда-специфическими антителами (BD Biosciences) и проточной цитометрией. Подкласс IgG1 определяли в супернатантах клонов с использованием набора Pro-Detect ™ Rapid Human Antibody Isotyping Assay Kit (Thermo Fisher Scientific).РНК

была очищена от положительных клонов, а кДНК синтезирована путем обратной транскрипции с использованием Superscript IV VILO Master Mix (Thermo Fisher Scientific) с последующей амплификацией вариабельной области транскриптов IgH, Igκ и Igλ с помощью ПЦР с праймерами, распознающими семейно-специфичную тяжелую цепь. (HC) лидерные последовательности (Vh2-VH6) [12] или лидерные последовательности легкой цепи (LC) (Vκ1 / 2, Vκ3-Vκ4 и Vλ1-Vλ8) [13] и обратные праймеры, комплементарные константным областям Ig (Cγ / Cκ / Cʎ) с использованием ДНК-полимеразы GoTaq (Promega, Мэдисон, Висконсин, США).

положительных результатов ПЦР очищали с помощью Wizard SV Gel и PCR Clean-Up System (Promega) и секвенировали (Eurofins Genomics, Ebersberg, Германия). Последовательности выравнивали с генами зародышевой линии и анализировали с помощью программного обеспечения IMGT.

2.4. Размножение клеток в бессывороточной среде для очистки антител

Для очистки антител клоны В-клеток размножали в среде X-VIVO 15 (Lonza, Verviers, Бельгия). MAb очищали из объединенных супернатантов с использованием смолы Protein A Ultralink (Thermo Fisher Scientific) и элюировали в буфере для элюции Gentle Ab / Ag (Thermo Fisher Scientific) в соответствии с инструкциями производителя.Очищенные mAb диализовали в течение ночи против PBS и стерилизовали фильтрацией 0,2 мкМ (Meran, Стамбул, Турция).

2.5. Тест на нейтрализацию SARS-Cov-2
Очищенные моноклональные антитела были протестированы на нейтрализацию с использованием трех штаммов вируса: Clade G VR10734 (мутант S-D614G, hCoV-19 / Италия / LOM-INMI-10734/2020; идентификатор доступа GISAID: EPI_ISL_568579), Clade O (2019-nCoV / Италия-INMI1; идентификатор доступа GISAID EPI_ISL_410546) и VOC 202012/01 (hCoV-19 / Италия / CAM-INMI-118/2020; идентификатор доступа GISAID: EPI_ISL_736997; происхождение B1.1.7) с серийным разведением очищенного антитела из двух положительных клонов (от 0,5 мг / мл до 0,5 нг / мл) в соответствии с опубликованными процедурами [14]. Вкратце, mAb разводили в бессывороточной среде и титровали в двух экземплярах в десятикратных разведениях. Равные объемы 100 TCID 50 на лунку каждого штамма вируса и разведения mAb смешивали и инкубировали при 37 ° C в течение 30 минут, а затем добавляли к субконфлюэнтным клеткам Vero E6 и инкубировали при 37 ° C и 5% CO 2. . Серонейтрализацию измеряли после 72 ч инкубации на основании цитопатического эффекта, наблюдаемого в инвертированном микроскопе [14].Сыворотка из Национального института биологических стандартов и контроля Великобритании (NIBSC) с известным титром нейтрализации использовалась в качестве эталона в анализе микронейтрализации (исследовательский реагент для антител против SARS-CoV-2, код NIBSC 20/130). Чтобы стандартизировать процедуры анализа, образцы положительного контроля, показывающие высокую (1: 160) и низкую (1:40) нейтрализующую активность, и образцы отрицательного контроля были включены в каждый сеанс анализа микронейтрализации. Наибольшее разведение сыворотки, ингибирующее цитопатический эффект, указывает на титр нейтрализации.

4. Обсуждение

Мы описываем здесь выделение и последовательности двух моноклональных антител, специфичных к белку-шипу SARS-CoV-2, полученному от выздоравливающего пациента с COVID-19. Результаты показывают, что идентификация и выделение антиген-специфичных моноклональных антител может быть достигнута от иммунных доноров относительно быстро, с использованием метода с низкой пропускной способностью и в сложных условиях сразу после неожиданного и драматического пандемического пика [9,10]. Выделенные клоны, иммортализованные EBV, были размножены in vitro и могли продуцировать достаточно очищенных mAb для функционального анализа без дополнительной генной инженерии для продукции рекомбинантных mAb в клеточных линиях HEK293 или CHO, как это обычно выполняется при разработке терапевтических mAb.Достаточный супернатант и замораживание клеток для целей первоначального скрининга были достигнуты на 39 и 47 день после инфицирования EBV для двух положительных клонов, соответственно. Всего было засеяно 1200 лунок, и скрининг всех клонов (около 120), включая медленно растущие, был проведен в течение 10 недель после иммортализации. Метод выделения поликлональных иммортализованных клеточных линий EBV для получения терапевтических человеческих антител был впервые описан в конце 1970-х годов [15,16]. Добавление стадии клонирования привело к идентификации, производству и использованию терапевтических человеческих mAb против резуса D [11,17].Позже были разработаны и оптимизированы модифицированные методы выделения В-клеток памяти и / или антиген-специфических В-клеток, повышения частоты инфицирования ВЭБ и размножения отдельных клонов, в первую очередь группой Антонио Ланзавеккья. Действительно, человеческие mAb против широкого спектра инфекционных агентов, включая SARS-CoV, вирус гриппа, лихорадку Эбола, ВИЧ и т. Д., Были относительно легко идентифицированы и изолированы [1,2,3,4,18,19,20]. В наших условиях мы наблюдали, что высев 10–50 инфицированных В-клеток памяти на лунку в 96-луночные планшеты был лучшей концентрацией, позволяющей разрастаться примерно в 1 из 3–10 лунок, что является разумной гарантией клональности.Действительно, последующее иммунофенотипирование и секвенирование подтвердили клональность увеличенных клеток. К сожалению, большинство клонов от донора B было потеряно из-за загрязнения, и два изолированных клона не продуцировали нейтрализующие антитела, как ожидалось. Интересно отметить, что процент положительных клонов соответствовал положительности супернатантов из пулов EBV-LCL от одних и тех же доноров. Донор B имел положительный сигнал в своем пуле EBV-LCL и показал уровень положительности почти 7% при скрининге клонов (2/29), тогда как донор A не имел положительного сигнала от супернатанта пула EBV-LCL, и ни один клон не был идентифицировано (0/91), что свидетельствует о частоте клонирования ниже 1%.Эти данные предполагают возможные стратегии скрининга сначала пулов EBV-LCL, которые растут в течение 2–3 недель после инфицирования EBV, и последующего сосредоточения анализа на клонах от доноров, показывающих положительные сигналы в пулах. Результаты также согласуются с предыдущими отчетами об исследовании частоты вирус-специфических В-клеток памяти IgG + , которая, как было обнаружено, варьировала от 0,1% до 25% у разных доноров или при зондировании разных антигенов или вирусов [21,22] . Сообщалось также, что эта частота увеличивается до 5–200 раз после повторной вакцинации или на пике пост-естественной инфекции [21,22].Аналогичные данные были опубликованы для В-клеток памяти и плазмобластов, специфичных для SARS-CoV-2 [23,24]. Чтобы облегчить скрининг клонов, несколько групп показали, что можно измерить их частоту у разных доноров, а также очистить эти клетки используют меченые рекомбинантные белки для облегчения выделения специфических mAb [5,25]. Мы попытались сделать это, используя первый коммерчески доступный меченый шип SARS-CoV-2 или рекомбинантные белки нуклеокапсида, но не смогли идентифицировать конкретный сигнал (данные не показаны).Причина этой неудачи не ясна, но отчасти может быть связана с тем фактом, что исходные коммерчески доступные реагенты не были оптимальными и что природный спайковый белок является тримерным белком [26,27]. Существуют другие стратегии для выделения человеческих антигенспецифических моноклональных антител. от иммунизированных доноров, например, прямое секвенирование доменов VH и VL путем секвенирования РНК (scRNA seq) очищенных единичных антиген-специфических В-клеток памяти или секретирующих антитела плазматических клеток [1,25,28,29,30,31,32 , 33]. Однако они требуют времени, требуют субклонирования последовательностей VH / VL в плазмидных векторах, трансфекции в клетках млекопитающих и очистки рекомбинантных mAb перед проведением функциональных анализов.Таким образом, для этих методов требуются более специализированные лаборатории с уже установленными высокопроизводительными методами [5,25,32,33]. Используемый здесь метод иммортализации EBV позволил нам непрерывно размножать клетки, производя антиген-специфические антитела в супернатанте до 140 дней после заражения и 100 дней после положительной идентификации клона. Можно также очистить миллиграммы mAb. Кроме того, секвенирование VH и VL на ранних и поздних этапах культивирования показало, что в течение этого периода времени в двух изолированных клонах не происходило никаких значительных соматических мутаций.Стабильность продукции mAb иммортализованными EBV В-клетками несколько противоречива, и в литературе имеется мало данных по этому поводу. Некоторые группы сообщили о продолжающихся мутациях или нестабильной экспрессии в течение времени [34]. Однако эти наблюдения могут быть результатом того факта, что в некоторых случаях изучались клеточные линии, а не клоны, или использовались другие методы иммортализации [34]. Наблюдаемая нами стабильная экспрессия mAb клонами EBV согласуется с результатами группы Lanzavecchia [1].Таким образом, этот метод позволяет относительно быстро выполнять ряд функциональных анализов, таких как измерения аффинности, а также анализы нейтрализации с использованием антител, продуцируемых естественными человеческими В-клетками, которые, как ожидается, несут все естественные посттрансляционные модификации антител, такие как гликозилирование [ 35]. Кроме того, для этого метода требовалось несколько специализированных компонентов, и он был реализован в стандартной лаборатории по культивированию клеток в критический период взрывной пандемии. У нас также было преимущество наличия местных доноров (из персонала больницы и лаборатории), что позволило быстро идентифицировать доноров с высокими сывороточными титрами антител против SARS-CoV-2.Донор B также имел детектируемые антитела против нуклеокапсида в пуле EBV-LCL, но не было идентифицировано клонов против нуклеокапсида в немногих, которые можно было проанализировать. Интересно, что донор B испытывал симптомы COVID-19, в частности лихорадку, в течение примерно 2 недель и имел высокий титр анти-спайк-антител в его сыворотке (150 МЕ / мл), тогда как донор A даже не осознавал, что инфицирован, пока у нее был положительный результат на антитела против SARS-CoV-2 (65–68 AU / мл) в контексте скрининга всего персонала больницы в мае 2020 года.На данный момент мы не можем знать, являются ли высокие уровни mAb и высокая частота антиспайковых В-клеток у донора B результатом симптоматической инфекции с более высокой вирусной нагрузкой, более длительным воздействием вируса или другими факторами. Сбор крови проводился через 4 месяца после подтверждения ПЦР симптоматической инфекции для донора B и предположительно через 2–4 месяца после бессимптомной инфекции для донора A, что позволяет предположить, что время сбора крови существенно не различалось между двумя донорами. Корреляция между титром нейтрализации или частотой В-клеток памяти, экспрессирующих антиспайк, и тяжестью заболевания была показана ранее на больших когортах пациентов [36,37].Клоны были идентифицированы с помощью теста DiaSorin SARS-CoV-2 spike S1 / S2, но, к сожалению, не нейтрализовали в анализах инфекции in vitro с использованием различных изолятов SARS-CoV-2, принадлежащих к разным кладам. Наши результаты согласуются с предыдущими исследованиями, показывающими, что у выздоравливающих пациентов наблюдается сильный ответ антител на спайковый белок, но только небольшая часть антител направлена ​​против рецептор-связывающего домена (RBD) и нейтрализует [36,38,39 , 40]. Было показано, что 90% нейтрализующих антител направлены против RBD, напрямую ингибируя связывание спайка с ACE2.Остальные 10% нейтрализующих mAb распознают N-концевой домен (NTD) или стебельчатые области S1 или S2 [32,33,41,42,43,44,45,46,47]. Некоторые нейтрализующие антитела могут мешать RBD или спайковать конформационные изменения белка при связывании ACE2 или с механизмом слияния S [48,49]. Кроме того, индукция выделения белка S1 была связана с нейтрализующей способностью [46,47]. Было показано, что mAb, связывающие RBD, наиболее часто принадлежат к семействам IGHV3–53, IGHV3-66 и IGHV-1-2 [39,50], которые действительно отличаются от семейств IgHV, идентифицированных здесь (IGVH5-51 и 3- 23).Хотя два выявленных здесь mAb не проявляют нейтрализующей активности in vitro, они, тем не менее, могут быть полезны для диагностических или других целей, таких как исследования появляющихся вариантов SARS-CoV-2 или других β-коронавирусов [49]. Стоит отметить, что роль антител в борьбе с вирусными инфекциями сложна. В некоторых случаях было показано, что ненейтрализующие mAb in vitro усиливают защиту in vivo в сочетании с нейтрализующими антителами, предположительно за счет Fc-опосредованных эффектов [7,51].Некоторые антитела, напротив, могут способствовать распространению вируса посредством механизма зависимого от антител усиления (ADE). Таким образом, идентифицированные здесь последовательности публикуются для облегчения будущих исследований.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *